Заживает пупочная ранка: обработка, сроки заживления, советы педиатров

Содержание

Уход за пупочной ранкой – 10 простых правил

Когда молодые родители остаются один на один с новорожденным малышом, у них зачастую возникают вопросы, ответы на которые необходимо получить незамедлительно. Как ухаживать за младенцем? Каким правилам следует придерживаться молодым родителям с первых дней, чтобы малыш рос здоровым и счастливым? В последнее время для молодых мам и пап является актуальной проблема ухода за пупочной ранкой младенца. В этой статье Вы найдете простые, но такие нужные советы по уходу за пупочной ранкой ребенка.

У многих деток через некоторое время после заживления пупочная ранка начинает «мокнуть» вновь. Так было и у нас. Почему это происходит и как с этим бороться? Однако, такое часто бывает. И необходимо всего лишь придерживаться нескольких простых правил по уходу за пупочной ранкой:

  1. Следить за животиком малыша, делать массаж и гимнастику. Да-да, не удивляйтесь! Основной причиной подобных проблем являются колики, повышенное газообразование в маленьком животике. Малыш испытывает дискомфорт и часто плачет, от этого большую нагрузку испытывают еще неокрепшие мышцы брюшного пресса – вот и страдает пупочная ранка.
  2. Купать малыша в кипяченой воде до тех пор, пока ранка не заживет. Бактерии, содержащиеся в некипяченой воде, могут препятствовать быстрому заживлению пупочной ранки.
  3. После купания следует просушить пупочную ранку, например, промокнув ее ватным тампоном.
  4. Ежедневно после купания обрабатывать пупочную ранку перекисью водорода (3%). Для этого необходимо капнуть в пупочную ранку 2-3 капли перекиси водорода, затем аккуратно промокнуть сухой ватной палочкой и обработать «зеленкой».
  5. Если пупочная ранка долго не заживает, пупочек постоянно «мокнет», обрабатывайте ранку перекисью водорода (3%) еще и по утрам. Также можно воспользоваться заживляющим кремом, например, Д-пантенолом.
  6. Ни в коем случае не убирайте корочки с пупочной ранки специально. Корочки указывают на то, что идет заживление ранки, а при грубом их удалении процесс заживления может затянуться. При обрабатывании перекисью водорода лишние корочки отойдут сами.
  7. Также не следует прижигать пупочную ранку спиртом, так как в данном случае может возникнуть ожог, а также алкоголь мгновенно проникает в кровь ребенка.
  8. Регулярно делать массаж околопупочного кольца, укрепляя тем самым мышцы брюшного пресса и улучшая кровообращение: совершать поглаживания по часовой стрелке, не задевая пупка, а также слегка «пощипывать» кожу вокруг пупочной ранки.
  9. Чаще выкладывать ребенка на живот. Это также поможет укрепить мышцы брюшного пресса.
  10. Даже, если кажется, что пупочная ранка зажила полностью, не забывайте еще некоторое время внимательно осматривать ее ежедневно.

Соблюдение этих простых правил поможет вам избежать лишних переживаний, а пупочная ранка вашего малыша быстро превратится в аккуратный пупочек!

когда заживает, когда втянется и как выглядит

После выписки из роддома самое страшное для молодой мамы — это обработка пупочной ранки. Если у вас с малышом было совместное пребывание в роддоме, то вы скорее всего уже научились это делать, а если малыш лежал отдельно, то вам следует знать несколько моментов.

Виды пупков

Во время беременности маму и малыша связывает пуповина. После ее обрезания канатик связывают оcобым образом, а через несколько дней отсохший хвостик отмирает сам, а у человека остается напоминание — пупок. И он может быть разным:

1 наружный

2 внутренний

3 выпуклый (когда сам пупок втянут, но на дне шарик-узелок

Как обрабатывать пупок малыша в домашних условиях?

Основные правила

Совершенно не важно чем вы будете обрабатывать пупок новорожденного. Главное — делать это чистыми руками, вовремя менять одежду, проглаживать ее, купать малыша или обтирать чистой водой ежедневно.

Чем обрабатывать?

Обработка пупка проходит ежедневно. Обрабатывать отвалившийся хвостик можно специальными растворами — Хлоргексидином, перекисью водорода, Банеоцином. Или не обрабатывать ничем, но следует четко соблюдать гигиену и обеспечить доступ воздуха к ранке. Не нужно ничем заклеивать ранку или закрывать подгузником.

Как проводить обработку?

1. После купания промочите пупочную ранку чистым ватным диском

2. На место ранки капните 2-3 капельки перекиси водорода (подуйте)

3. После того, как ранка перестанет пенится, уберите сукровицу и частички кожицы чистым ватным тампоном или ватной палочкой.

4. Обработайте раствором, который НАЗНАЧИЛ ВРАЧ или МЕДСЕСТРА. 

Обработка ранки закончена. Все заняло не более пары минут.

Как купать ребенка, если пупок еще не зажил?

Купайте кроху только в отдельной ванне, предварительно ее помойте. Во время купания старайтесь не трогать пупочную ранку и не пользуйтесь моющими средствами. Только чистая вода. Можно добавить слабый раствор марганцовки, ромашки или череды.

Через какое время заживает пупок у новорожденного?

Нельзя четко сказать, когда отпадет пупок или когда заживет пупочная ранка. У некоторых малышей это происходит на 2 день после родов, а у кого-то за 7. Все индивидуально. 

Если вы видите, что пупочная ранка воспалилась, покраснела или из нее выделяется сукровица, кровь или гной — обратитесь к врачу.

Когда нужно волноваться?

В норме пупочная ранка не выглядит воспаленной, но в открытую рану легко может попасть инфекция. Чтобы обезопасить новорожденного, вам следует обрабатывать пупок только чистыми материалами и чистыми руками, не выкладывать малыша на живот слишком рано, тщательно следить за своим здоровьем, чтобы не передать инфекцию крохе.

На что еще обратить внимание

  • Грыжа — уплотнение под широким пупочным кольцом
  • Гранулема — разрастание ткани внутри и вокруг пупочного кольца
  • Мокнущий пупок — признак воспаления
  • Пупочный свищ — из пупка выделяется моча, желчь или содержимое кишечника
  • Ранка не воспалена, но заживает долго — не хватает иммунитета

Как лучше обрабатывать пупок у новорожденного?

Пупочная ранка у новорожденного — это небольшое отверстие, оставшееся после отсыхания пуповинного остатка. При правильном уходе заживает в течение месяца и не причиняет дискомфорта.

Виды пупков

Шрам от пупочного канатика, который связывал нас когда-то с плацентой — это пупок. По тому, как выглядит пупок у новорожденного, основным нюансам внешности, пупки условно делятся на виды:

  • наружный: пупочный узелок целиком заполняет ямку и находится снаружи;
  • внутренний: ярко выражена только пупочная ямка, дно которой сходится в точку;
  • выпуклый: пупок втянут, на дне узелок образует шарик;
  • «спираль»: пупочная складка и узелок образуют спираль, ямку не видно;
  • ровный: узелок на одной линии с поверхностью живота.

Что делают в роддоме

Внутри пуповины находятся вена и две артерии для дыхания и вывода отходов. После первого вдоха пуповина у новорожденного сжимается и в ней останавливается ток крови. Когда прекращается пульсация, ее перерезают. Сейчас все больше врачей ждут дополнительно 3-4 минуты, пока ребенку перейдет побольше крови, богатой кислородом и питательными веществами. Затем на «хвостик» на расстоянии 2-3 см от животика надевается медицинская прищепка, а ребенка отдают на первое кормление. Раньше пупочный канатик крепко перевязывали ниткой и отрезали («завязывали пупок»).

Операция проходит быстро и безболезненно.

Как ухаживать за пупочком малыша

В роддоме обработкой занимается врач, но перед выпиской маме объясняют, как ухаживать за пупочной ранкой дома.

Чем обрабатывать

Родителям важно знать, что как только отвалился пупок у новорожденного, за состоянием ранки необходимо внимательно следить.

Существует практика, когда ранка ничем не обрабатывается, — соблюдаются ее чистота, сухость и приток воздуха. Но чаще врачи рекомендуют обработку перекисью водорода, зеленкой и слабым раствором марганцовки.

Как ухаживать

Основное правило —.соблюдение гигиены: чистые руки, чистая одежда и подгузник на ребенке, купание или обтирание каждый день.

Как происходит обработка пупка у новорожденного в домашних условиях:

  1. После купания промокните пупочную ранку ватным диском.
  2. Немного раскройте пальцами края и капните 2-3 капли перекиси (появится пена).
  3. Сукровицу и размокшие корочки удалите ватной палочкой от серединки к краю.
  4. Промокните ранку стерильным ватным шариком, смоченным в слабом растворе марганцовки.

Все действия займут несколько минут и не причинят боли малышу, если вы будете осторожны.

Как купать

Купайте новорожденного только в отдельной ванночке, в кипяченой воде, остывшей до 37 градусов. Первые 2 недели добавляется немного растворенной марганцовки или морской соли. Нельзя пользоваться гелями для душа, мылом и шампунем.

Как надевать подгузники и одежду

При одевании младенца с незажившим пупком ­ будьте осторожны, чтобы не содрать корочку. Используйте подгузники с вырезом или спускайте их пониже. Не надевайте штанишки до полного заживления.

Сроки заживления

Невозможно точно сказать, на какой день отпадает пупок у новорожденных, — это зависит от организма ребенка и от объема самой пуповины. Остаток отваливается на 2-7 день после родов, а ранка затягивается за месяц. Большое влияние оказывает питание ребенка и уход за ним.

Если пупочная ранка не заживает

Если пупок так и не зарос новой кожицей или наблюдаются признаки воспаления, вызовите врача. Не занимайтесь самолечением, особенно народными средствами, чтобы не усугубить ситуацию.

Инфекция

Каждый день внимательно осматривайте пупочную ранку. В норме она нормального цвета и чистая, без признаков воспаления. В открытую ранку легко попадает инфекция.

Причины воспаления:

  • несоблюдение правил гигиены;
  • раннее выкладывание на животик;
  • инфекция в организме мамы.

Если иммунитет не справляется, начинается омфалит: пупок мокнет, выделяется гной и сукровица, образуются корочки. Кожа вокруг ранки краснеет и припухает, ребенок отказывается от еды, срыгивает, поднимается температура. Запущенный омфалит переходит в пупочный сепсис, поэтому необходима госпитализация.

Грыжа

Выглядит как уплотнение под широким пупочным кольцом. Определяется при пальпации. Небольшие грыжи закрываются сами и дискомфорта не приносят. Лечение состоит из массажа, операция назначается только в случае, если грыжа больше 2 см или не закрылась до 5 лет. При потемнении пупка или его болезненности посетите врача. Появление грыжи не зависит ни от крикливости ребенка, ни от того, через сколько отпадает пупок у новорожденных (раньше или позже недели). Это излечимая врожденная патология.

Гранулема

Другое название — ­ фунгус. Представляет собой разрастание ткани внутри и вокруг пупочного кольца. Выглядит как маленький плотный комок, покрытый желтыми выделениями или сукровицей.

Причины гранулемы:

  • бактерии в пупочной ранке;
  • большая пуповина, ткани которой заменились соединительными при усыхании.

Поддается лечению на любой стадии.

Ранка мокнет

Мокнущий пупок — признак воспаления.

Причины:

  • нарушение правил гигиены;
  • использование неподходящих дезинфекторов;
  • сдирание корочки с ранки;
  • плохой иммунитет ребенка;
  • низкая свертываемость крови;
  • ожог средствами для обработки;
  • инфекция.

При влажности пупочной ранки родителям следует предпринять меры:

  • не выдавливайте гной и не сдирайте корочки;
  • используйте для обработки только стерильные материалы;
  • обеспечьте приток свежего воздуха к ранке;
  • проглаживайте постельное белье и одежду малыша горячим утюгом.

Другие проблемы

Какие еще могут возникать проблемы:

  • пупочный свищ: протока внутрь, к мочевому пузырю или органам брюшной полости. Из пупка выделяется моча, желчь или содержимое кишечника, что приводит к инфекции. Формируется при развитии ребенка в утробе и лечится только операцией;
  • попадание инородного тела в пупок: приводит к покраснению вокруг ранки и внутри нее, в дальнейшем — к нагноению. Ранку необходимо промыть перекисью и почистить, при продолжении воспаления вызвать врача;
  • ранка не воспалена, но заживает долго — организму ребенка не хватает сил. Обратите внимание, достаточно ли ребенку витаминов: как выглядят его кожа, волосы и ноготки;
  • сильное кровотечение: кровь из пуповины новорожденного идет из-за травмы пупочной ранки. Обработайте пупок перекисью и подсушите.

Что делать нельзя

Даже если вы очень беспокоитесь за здоровье ребенка, есть вещи, которые категорически нельзя делать с пупочной ранкой:

  • класть посторонние предметы: монетки, камушки и др.;
  • лить травяные настойки: многие травы вызывают аллергию, спирт обжигает;
  • закрывать доступ воздуха к ранке: мазать мазями, маслами, заклеивать пластырем или бинтом;
  • растягивать или сжимать для изменения формы: подобные действия не помогут и приведут к травме.

Форма пупка не влияет на характер и здоровье и не зависит от того, каким способом его завязали (исключая случаи явного непрофессионализма). При нормальном состоянии здоровья пупок новорожденного в месяц заживает полностью или почти полностью.

0

0

15477

Facebook

Twitter

Мой мир

Вконтакте

Одноклассники

Пупок у новорожденного – особенности ухода

Уход за крохой в первые дни жизни доставляет родителям волнения, переживания и страхи. Одним из пугающих моментов является обработка пупка новорожденного. Тут нечего бояться. Главное, правильно проводить процедуру и тогда не произойдет инфицирования, и пупочная ранка быстро заживет.

Перевязывание и отпадание пуповины

Во время внутриутробной жизни, пуповина является для ребенка основным источником питания. Вскоре после рождения кровоток по ней прекращается, и организм начинает функционировать самостоятельно.

Пуповину отсекают сразу после появления малютки на свет, либо через несколько минут после прекращения пульсации. Она пережимается при помощи зажима и отрезается стерильными ножницами. После чего на небольшом расстоянии от пупочного кольца она перевязывается шелковой нитью или пережимается специальной скобкой.

Остаток пуповины через пару дней может быть удален хирургическим способом. Также его могут не трогать, оставив подсыхать и отпадать самостоятельно – это происходит в течение 3-6 суток. Как в первом, так и во втором случае остается раневая поверхность, которая требует ухода.

Уход за пупком малыша

Уход за пупочной ранкой новорожденного прост и не должен вызвать трудностей. Нужно придерживаться правил:

  • Не нужно помогать отпасть пуповине – процесс должен происходить естественно.
  • Чтобы ранка хорошо заживала, нужно обеспечить доступ воздуха. Нужно устраивать малышу регулярные воздушные ванны.
  • Проследите, чтобы подгузник или пеленка не натирали область пупка.
  • Пока пуповина не отпадет, ребенка не стоит купать. Лучше ограничиться обмыванием некоторых участков тела и обтиранием влажной губкой. После отпадания пуповины малыша можно купать. Делать это нужно в небольшой ванночке в кипяченой воде. В воду рекомендуется добавлять разведенную в отдельной емкости марганцовку, чтобы крупицы марганцовки не обожгли кожу новорожденного. Вода для купания должна иметь бледно-розовый цвет.
  • После купания дайте пупку просохнуть, а затем его обработайте. Это нужно делать до полного заживления.
  • Проглаживайте пеленки и распашонки крохи.
  • Заживление пупка новорожденного проходит около двух недель. Все это время пупочную ранку нужно обрабатывать 2 раза в день – утром и после купания.

Обработка пупка у новорожденного

Прежде, чем начинать процедуру, следует вымыть руки и обработать их дезинфицирующим раствором, например, спиртом. Для обработки пупка новорожденного используется перекись водорода. Ее можно наносить при помощи ватного тампона или пипетки, нанеся на ранку несколько капель препарата.

В первые насколько дней жизни из пупка крохи в небольших количествах могут появляться кровянистые выделения. К ранке на несколько минут необходимо прикладывать смоченный в перекиси ватный тампон.

На пупочной ранке могут образовываться небольшие кровянистые или желтоватые корочки, являющиеся благоприятной средой для формирования болезнетворных микробов. Их необходимо удалять после того, как они размокнут от перекиси. Пальцами раздвиньте края пупка, затем при помощи смоченной перекисью ватной палочки, в направлении от центра ранки осторожно, удалите корочки. Если частицы не хотят удаляться, не нужно их отдирать, поскольку это может привести к кровотечению.

После обработки дайте пупку просохнуть, а затем смажьте его зеленкой. Раствор нужно наносить только на ранку. Не стоит обрабатывать всю кожу, находящуюся возле нее.

Когда нужно обратиться к врачу

  • Если пупок долго не заживает.
  • Кожа вокруг него припухшая и красная.
  • Из пупочной ранки идут обильные выделения.
  • Появились гнойные выделения с неприятным запахом.

купание до и после заживления пупочной ранки

Существует много мнений когда и в какой воде первый раз купать новорожденного.
Мнений столько же, сколько людей.

Самый главный вопрос, который должен беспокоить родителей при любых манипуляциях с новорожденным – не наврежу ли я ребенку своими действиями. И лишь вторым будет вопрос как улучшить тот результат, который уже есть. Советчиков вокруг миллион. Вот и про купание одни говорят купать в кипяченой воде, другие – в обычной из-под крана. Бабушки спорят с молодыми мамами по поводу температуры воды (прохладная или горячая?). Нужно ли добавлять в воду марганцовку или не нужно? В какой ванной,  большой или маленькой? Можно ли купать ребенка до заживления пупочной ранки или только после? Можно ли купать в день выписки из роддома?
Вопросов тысячи.

Начнем с рассмотрения вопроса купания относительно пупочной ранки.

Мнения педиатров в этом вопросе скачут от одной крайности до другой – одни педиатры говорят о том, чтобы новорожденного вообще не купать до заживления пупочной ранки, а делать влажные обтирания, пока пупочек не заживет.
Другие уверяют, что можно купать в обычной водопроводной воде с добавлением слабого раствора марганцовки и ни о чем не беспокоиться. РЕШАТЬ ВАМ, к какому голосу прислушаться.

Мое же мнение таково. У здорового новорожденного пупочная ранка заживает на 10-14 сутки после рождения.
Я бы не стала отказывать малышу в купании до заживления ранки, т.к. это улучшает аппетит, сон, общий тонус (представьте себя на его месте!). Первую неделю (с момента выписки из роддома до заживления пупочной ранки) лучше купать малыша в кипяченой воде. Вода в городском водопроводе сильно хлорированная и содержит много примесей (ржавое железо, например). При кипячении вы убиваете несколько зайцев сразу – вода и дезинфицируется, и становится мягче за счет выпадения солей (в виде накипи на чайнике), и хлор из неё улетучивается.

На мой взгляд, всегда лучше перебдеть.
Действительно, лучше 5 дней (пять дней – это совсем не долго) кипятить воду, чем потом месяц лечить осложнения в пупочной ранке.
Можете делать через раз – один день ванну с кипяченой водой, другой – обтирания.

После того как малышу исполнится 10-14 дней (и нет никаких осложнений со стороны пупочка) купайтесь смело и на здоровье в обычной водопроводной воде.
Воду кипятить уже не надо, точно!
Не бойтесь, что ребенок хлебнет водопроводную воду, в этом нет ничего страшного.

После заживления пупочной ранки кипятить воду не надо.

На вопрос «можно ли купать новорожденного в день выписки из роддома?» вам должен ответить неонатолог прямо перед выпиской. Обычно в день выписки делают прививку БЦЖ, тогда педиатр обязан предупредить молодую маму, что сегодня купать нельзя. Если же прививку сделали заранее и никаких запретов от ведущего вашего ребенка педиатра вы не получили – купайте на здоровье!

Череда. Лечебные свойства в педиатрии
Про марганцовку. Добавлять или нет.
Как правильно развести марганцовку для купания новорожденного.
Как правильно приготовить череду для купания
В чем купать – в большой ванне или в детской ванночке?
Какой температуры должна быть вода при купании?

(3)(6)

Обработка пупочной ранки у новорожденного

За образовавшейся пупочной ранкой нужно ежедневно следить и ухаживать, чтобы в неё не попала инфекция.

После рождения ребёнка пуповину перерезают, оставляя небольшую часть около 1, 5 см. Этот пуповинный остаток не удаляют. Он отпадает сам на 3-5 день жизни. Пока вы находитесь в роддоме, вам объяснят и покажут, как правильно обработать образовавшуюся пупочную ранку.  Отбросьте опасения сделать что-то не так, навредить малышу. На самом деле, ничего сложного в процедуре ухода за пупком у новорожденного нет.

Для обработки пупка у новорождённого вам понадобятся:

  • ватные палочки или ватные диски;
  • 3%-ный раствор перекись водорода;
  • бриллиантовая зелень («зеленка»). Её можно заменить любым антисептиком: 5%-ный раствор йода, 70%-ный раствор спирта или перманганат калия в растворе («марганцовка»).
При использовании раствора марганцовки следите, чтобы её концентрация была очень слабой во избежание раздражения или даже ожога.

Уход за пупочной ранкой новорождённого

После выписки из роддома молодая мама, в числе других процедур по уходу за новорождённым, обрабатывает и пупочную рану крохи.

Уход за пупочной ранкой новорождённого поначалу пугает новоиспечённых родителей. Им кажется, что ребёнку больно от прикосновений ватной палочкой или обработки перекисью водорода или зеленки. На самом деле нет – ведь малыши не плачут при этом.

Пупочная ранка у новорождённого требует аккуратного ухода и пристального к себе внимания. Необходимо следовать рекомендациям врачей, одевать ребёнку одежду, которая не будет натирать детский животик, не стягивать подгузник, чтобы пупочная ранка не травмировалась.

А ещё не надо опасаться купать ребёнка. Многие молодые мамы ошибочно предполагают, что таким образом они могут инфицировать незаживший участок. Но если ванночку для ребенка делать с соблюдением рекомендаций врача-педиатра – последствий не будет. Напротив, корочки, находящиеся в пупочной ранке, в воде станут отмокать и сходить быстрее.

Как правильно обрабатывать пупочную ранку

Ежедневно, а лучше – два раза в день, когда чистите малышу ушки, носик и глазки, не забывайте и про пупочную ранку. На 10-15-й день после рождения пупок у крохи заживает. До этого момента ранке нужен уход и свежий воздух, который поможет ей зажить гораздо быстрее. Забудьте про использование пластырей — это может спровоцировать раздражение нежной кожи младенца. 

Форма пупка у всех разная, она зависит от физиологических особенностей организма. Повлиять на формирование пупочного кольца в период заживления ранки нельзя.

Как обработать пупочную ранку новорожденному:

  • Тщательно вымойте руки с мылом.
  • Возьмите ватную палочку, смоченную в 3%-ном растворе перекиси водорода, приложите её к центру пупка новорожденного.
  • Подождите несколько секунд, если появилась небольшая пенка, значит в ранке ещё присутствуют частички крови.
  • Уберите чистой ватной палочкой или ватным диском оставшиеся засохшие частицы. Не бойтесь свободной рукой слегка раздвинуть края ранки – так будет удобнее обрабатывать пупок.
  • Сухим ватным диском протрите ранку.
  • Ватной палочкой, смоченной в любом из вышеперечисленных антисептиков, обработайте пупок новорожденного, не выходя за его пределы.
  • Дайте ранке немного проветриться и можете одевать ребёнка.
Если пупочная ранка не заживает дольше трех недель, пупок новорожденного покраснел, воспалился, опух, и из него сочится кровь – обратитесь к врачу во избежание развития инфекции.

Можно ли купать грудничка в период процедур ухода за пупочной ранкой?

Пока ранка не зажила, купать ребёнка можно и нужно, но только в кипяченной воде с добавлением раствора марганцовки. Насыпать кристаллы марганцовки непосредственно в ванночку категорически нельзя. Они не всегда полностью растворяются и, попав на кожу малыша, могут вызвать ожог.  Раствор должен быть тёмным, а вода для купания светло-розовая.

Полезны ванночки с чередой и ромашкой, так как способствуют быстрому заживлению ран, обладают антибактериальными свойствами и снимают раздражения кожи.

Если пупочная ранка у новорождённых кровит

Уход за пупочной ранкой новорождеённого – это ежедневные гигиенические процедуры, включающие в себя её промывание и дезинфекцию. Если рана хорошо заживает – молодая мама спокойна.

Но если что-то идёт не так – пора обращаться за помощью к педиатру. Например, когда пупочная ранка у новорождённых кровит. Хотя врачи предупреждают, что ранка может слегка кровоточить в течение недели. Если продолжается более длительный период, это может стать признаком инфицирования. На что обращать внимание: пупочная ранка у новорожденного воспалилась, кожа вокруг нее покраснела и чувствуется гнилостный запах. Значит, нужно начинать лечение.

Есть и другая причина, по которой пупочная ранка может кровить: при её заживлении на дне детского пупочка разрастаются сосуды и соединительная  ткань. Они и мешают заживлению пупочка. Помочь может процедура прижигания.

Когда заживает пупочная ранка у новорождённых

Правильный уход за пупочной ранкой новорождённого способствует её скорому  заживлению. Это обычно происходит в течение двух-трёх недель, из которых восемь дней ранка может кровить.

Если кровоточивость не проходит к десятому дню, это признак, что заживлению что-то мешает. Причину и способ лечения должен определить врач-педиатр.

Когда заживает пупочная ранка у новорождённых, её нельзя травмировать одеждой и тесным подгузником. Поэтому многие производители делают специальную выемку в своей продукции, которая предназначена для недавно родившихся детей. Если такой выемки в ваших подгузниках нет, её легко сделать самостоятельно – попросту вырезать.

Оцените материал:

спасибо, ваш голос принят

 

Страница не найдена |

Страница не найдена |

404. Страница не найдена

Архив за месяц

ПнВтСрЧтПтСбВс

3456789

10111213141516

17181920212223

24252627282930

31      

       

       

     12

       

     12

       

      1

3031     

     12

       

15161718192021

       

25262728293031

       

    123

45678910

       

     12

17181920212223

31      

2728293031  

       

      1

       

   1234

567891011

       

     12

       

891011121314

       

11121314151617

       

28293031   

       

   1234

       

     12

       

  12345

6789101112

       

567891011

12131415161718

19202122232425

       

3456789

17181920212223

24252627282930

       

  12345

13141516171819

20212223242526

2728293031  

       

15161718192021

22232425262728

2930     

       

Архивы

Фев

Мар

Апр

Май

Июн

Июл

Авг

Сен

Окт

Ноя

Дек

Метки

Настройки
для слабовидящих

Уход за пуповиной в Эфиопии и влияние на изменение поведения: качественное исследование | BMC International Health and Human Rights

Участники исследования

В таблице 1 показаны некоторые социально-демографические характеристики участников исследования. Большинству матерей было от 20 до 40 лет, тогда как бабушки и ТВА в основном старше 40 лет. Большинству HEW было от 20 до 30 лет. Высока доля матерей, имеющих 5 и более детей. Большинство участников из сообщества неграмотны, тогда как HEW имеют не менее 11 классов образования.

Перевязывание и перерезание пуповины

Матерей спрашивали об уходе за пуповиной после их последних родов, почти все это происходило дома с несколькими женщинами, которые после родов были доставлены в медицинское учреждение. Из 24 опрошенных матерей 22 сообщили, что пуповину перерезали новым лезвием бритвы, которое иногда кипятили перед использованием. Мать из общины оромо использовала старое лезвие, а мать из общины Сидама использовала нож, которым обычно нарезали кочо — пищевой продукт, получаемый из ложного банана.Было больше различий в том, что использовалось для связывания шнура швейными нитками, нитью из керосиновых печей, сизалевой нитью, нитью или полосками ткани из местного одеяла, традиционной шали или простыней. HEW обычно использовали стерилизованную нить и ножницы, чтобы завязать и перерезать пуповину.

Обычно пуповину перерезали сразу после рождения и перед рождением плаценты, но у Сидамы ее иногда перерезали после родов. Все HEW, за исключением одного в Оромии, также сообщили, что они перерезали пуповину до рождения плаценты.Практика перерезания и связывания пуповины варьировалась в зависимости от исследуемых сообществ (см. Таблицу 2). Шнур перерезался на длину одного-двух суставов пальца или до целого пальца во всех общинах, кроме общины амхара. Обычно его завязывают только со стороны ребенка в общинах оромо и сидама, со стороны плаценты в общине амхара, с двух сторон в общине тиграи или вообще не завязывают в общине сидама. HEW обычно завязывали пуповину дважды — на расстоянии двух пальцев от ребенка и еще раз на расстоянии двух пальцев — и затем разрезали ее посередине.Исключением был HEW в Сидаме, который завязывал его только на боку младенца. Во всех исследуемых сообществах наблюдалась изменчивость в том, промывали ли пуповину во время обычного купания.

Таблица 2 Практика и взгляды сообщества на уход за пуповиной

Для перевязывания пуповины приводились разные причины, которые несколько отличались в зависимости от региона: для облегчения рождения плаценты в Амхаре, для остановки кровотока во всех регионах, для обеспечения выживания ребенка или матери в Оромии и Тыграе, для предотвращения попадания воздуха введение ребенка в Оромию, чтобы предотвратить возвращение плаценты внутрь или просто потому, что это предписывается культурой в Тыграе (таблица 2).Так, 65 летняя бабушка из района Амхара объяснила, что пуповина завязывается, «чтобы кровь вытягивала плаценту. Та, что со стороны ребенка, не завязана, так как уже запечатана». С другой стороны, 38-летняя мать из Тыграя, где пуповина перевязывается с обеих сторон разреза, сказала: «Пуповина будет перевязана до того, как ее перережут, потому что кровь будет течь от плаценты к ребенку и может создать проблема, и из нее тоже потечет кровь». 25-летняя мать из Оромии заявила: «Ребенок умрет, если пуповина не будет правильно завязана.HEW также вообще считали, что оставление пуповины несвязанной может привести к кровотечению и даже смерти ребенка.

Нанесение веществ

Девятнадцать из 24 матерей наносили что-то на пуповину сразу после ее перерезания или в первые дни после родов. Масло повсеместно применялось в Амхаре и Тыграе и широко применялось в Оромии, в то время как некоторые матери в Сидаме и Оромии сообщали, что применялись вазелин и лосьон для волос. Такие вещества обычно наносили сразу после перерезания пуповины у оромии и тиграя, тогда как у амхара и сидама нанесение чаще всего происходило на второй или третий день (таблица 2).Две матери, которые сообщили, что к пуповине ничего не прикладывали, были из общин Амхара и Сидама. HEW в основном ничего не наносят на шнур, за исключением HEW в Оромии и Тиграе, которые сказали, что применяют йод и Gensen Violet соответственно.

Наносили вещества на пуповину бабушки, мамы новорожденных, ТБ или соседки. Вещества обычно наносились осторожно кончиком пальца, а мытье рук перед применением было редкостью и не было нормой сообщества.Наиболее часто это вещество наносили на основание пуповины и область вокруг нее, хотя некоторые матери во всех четырех исследуемых сообществах также наносили его на выступающую часть и кончик пуповины. Применение веществ обычно продолжалось до отделения пуповины или до 7 и более дней после рождения. Аппликации проводились один-два раза в день в Амхаре и Оромии, три раза в день в Сидаме и один-три раза в день в Тыграе, обычно после омовения основания пуповины.

Для нанесения веществ на пуповину был указан ряд тесно связанных причин (Таблица 2). Наиболее часто упоминаемая причина, особенно в Оромии, Амхаре и Тыграе, заключалась в том, чтобы смягчить или увлажнить шнур, особенно у его основания, где ожидается его обрыв. 22-летняя мать из Оромии сказала: «Он защищает пуповину от пересыхания и повреждения. Это делает шнур мягким». 38-летняя мать из Тыграя также заявила: «Если мы не нанесем масло на пуповину и она высохнет, ребенку будет больно.Другая 22-летняя мать из Оромии сказала: «Мы наносим масло на пуповину, чтобы она не высыхала и не причиняла ребенку боль, прилипая к его одежде». HEW в Оромии и Тиграе, которые наносили йод или ВГ на пуповину в первый день после рождения, объяснили, что они делали это, чтобы предотвратить кровотечение или инфекцию. Последний сказал: «Выливаем ГВ из упаковки на кончик пуповины, не касаясь его руками, чтобы пуповина высохла и кровь не вытекала».

Считалось также, что применяемые вещества увлажняют пуповину, предотвращают образование язв и способствуют заживлению.Эту причину чаще всего упоминали матери и бабушки в Амхаре, Тыграе и Сидаме. 55-летняя бабушка из Сидамы сказала: «Мы наносим вазелин на основание пуповины ребенка, чтобы кожа вокруг нее не сморщивалась и быстрее заживала». Желание расслабить и способствовать заживлению кожи в месте отхождения пуповины было постоянной причиной нанесения веществ на основание пуповины. 65-летняя бабушка из Амхары уточнила: «Мы смазываем нижнюю часть шнура маслом, чтобы он был мягким и не порвался.Вместо этого новая кожа вырастет в пространстве, которое откроется, когда отпадет пуповина». Тесно связанной и часто упоминаемой причиной увлажнения основания пуповины было ускорение отделения пуповины. 45-летняя мать из Амхары объяснила: «Когда я наношу масло на край пуповины, она отпадает сама по себе, когда увлажняется изнутри».

Восприятие того, что пуповина влажная в первые один или два дня после рождения, было причиной того, что некоторые респонденты в Амхаре и Оромии откладывали нанесение на нее веществ (таблица 2).55-летняя бабушка из Оромии заявила: «В первый день ничего не применяется, так как пуповина еще влажная. Применение начинается со второго дня и далее». 30-летняя мать из Амхары, которая начала мазать маслом только на третий день, также сказала: «Младенец мокрый в день своего рождения. Когда пуповина высохнет, мы смазываем ее маслом, чтобы она отпала». Те, кто вообще ничего не прикладывал к пуповине в Оромии, Амхаре и Сидаме, объясняли, что это не принято, что в этом нет необходимости или что медицинские работники отговаривали их от этого.

Источники рекомендаций по уходу за пуповиной

Исследование выявило различные источники информации по уходу за пуповиной. Многие матери указали, что узнали об уходе за пуповиной через наблюдение или знакомство с местными обычаями. 25-летняя мать из Амхары заявила: «Никто не давал мне советов. Я применил то, что наблюдал, когда моя мать наносила масло и мыла пуповину».

Другим важным источником информации об уходе за пуповиной были советы бабушек, соседей, TBA и HEW.Бабушки во всех местах, кроме Сидамы, обычно советовали матерям смазывать пуповину маслом. 22-летняя мать из Оромии заявила: «Моя мать сказала мне смазывать культю пуповины маслом после каждого купания, чтобы она не прилипала к одежде». Бабушки, соседи, TBA и отцы также консультировали матерей по вопросам гигиены, включая необходимость регулярного купания пуповины, тела или одежды новорожденных. 56-летняя бабушка из Амхары сказала: «Я советую ей не спать в нечистом месте, каждый день менять одежду своего ребенка и купать его.60-летняя женщина из Сидамы сказала: «Я говорю ей, что обрубок пуповины отпадает на седьмой день, поэтому ей нужно продолжать мыть основание пуповины водой с мылом». Большинство HEW советовали матерям ничего не наносить на пуповину и держать ее сухой, чтобы предотвратить инфекцию, за исключением одного в Сидаме, который посоветовал им наносить тетрациклин на пуповину. HEW в Амхаре сказал: «Мы говорим им, что они не должны ничего наносить на шнур, и что он отвалится, даже если высохнет». Только два HEW сообщили, что советовали матерям купать пуповину, не тянуть за пуповину во время родов или обращаться в медицинское учреждение в случае инфицирования пуповины.

Риски и инфекции, связанные с пуповиной

Местное понимание рисков и инфекций, поражающих пуповину, влияет на усилия людей по их предотвращению и реагированию на них. Многие матери, бабушки и TBA не знали о каких-либо рисках или проблемах, затрагивающих пуповину. Те, кто был в курсе, описали язвы, неспособность зажить должным образом и кровотечение. Считается, что такие проблемы возникают, когда пуповина становится сухой или прилипает к одежде, особенно если не наносить масло или когда пуповину не промывают.30-летняя мать из Амхары сказала: «На пуповине могут появиться язвы. Если мы не будем мыть и массировать пуповину с маслом до тех пор, пока она не будет удалена, основание пуповины может треснуть и кровоточить». Другое состояние, которое было обнаружено матерью и бабушкой в ​​Амхаре и Оромии, соответственно, — это отек пуповины, который, по их мнению, возникал, когда пуповина не перерезалась должным образом или если ее тянули. Бабушка из Оромии объяснила: «Если они не перережут пуповину с должным вниманием и не будут тянуть ее при завязывании, пуповина может набухнуть.

Только одна мать и один TBA в Оромии, одна бабушка в Тыграе и один HEW в Сидаме признались, что видели покраснение пуповины, как показано на изображении, которое им показали, тогда как подавляющее большинство респондентов не видели его раньше. Ответ 38 летней бабушки из Амхары был типичен для последней группы: « Я никогда не видела такого покраснения ни у своего ребенка, ни у других». Три женщины, которые знали об этом, считали, что это вызвано несоблюдением гигиены или перетягиванием пуповины.Мать объяснила: «Если ребенка не купать ежедневно и его пуповину не содержать в чистоте, она станет вот такой красноватой». Бабушка и ТВА сошлись во мнении, что это произошло, когда дернули за пуповину. Первый сказал: «Это произошло потому, что дееспособная женщина не перерезала и не связала пуповину. Она тянула за шнур, когда разрезала и завязывала его». HEW, столкнувшийся с этим заболеванием, полагал, что оно было вызвано тем, что он не обрезал шнур на нужной длине или использовал ржавое лезвие для перерезания шнура.Хотя ранее они не видели покраснения пуповины, другие HEW признали, что это был признак инфекции, вызванной несоблюдением гигиены и применением веществ, или состоянием, которое возникло, когда пуповину вытягивали, неправильно перевязывали или перерезали. Женщины, которые распознали это состояние, а также большинство HEW сказали, что они возьмут или направят ребенка, у которого оно есть, в медицинский центр или к врачу.

Границы | Бесклеточный желатиновый материал пуповины человека улучшает заживление ран: потенциальное средство от недостаточного заживления ран

Введение

Рана описывается как нарушение нормальной здоровой анатомической структуры и функциональной целостности кожи (Atiyeh et al., 2002). Процесс заживления раны включает четыре интегрированных и перекрывающихся фазы: гемостаз, воспаление, пролиферацию и ремоделирование или рассасывание тканей (Gosain and DiPietro, 2004). Эти шаги позволяют реформировать и реваскуляризировать кожу, позволяя сформироваться функциональной дерме и эпидермису. Около 1,5 миллиарда человек страдают от кожных заболеваний, вызванных как прогрессирующим старением, так и отсутствием адекватной медицинской помощи (Valacchi et al., 2012). Среди них широко распространены поражения кожи, которые можно разделить на острые и хронические раны (Whitney, 2005).Сообщалось, что острые раны обычно следуют за травмой или воспалением и обычно заживают в течение 6 недель (Valacchi et al., 2012). При определенных обстоятельствах возникают хронические раны, также известные как незаживающие раны, которые не проходят нормальные этапы заживления ран и не заживают в течение 6 недель. др., 2009). Такие раны часто переходят в состояние патологического воспаления вследствие отсроченного, незавершенного или нескоординированного процесса заживления.Лечение хронической раны, определяемой как барьерный дефект, который не зажил в течение 3 месяцев, стало серьезной терапевтической проблемой во всем западном мире, и эта проблема будет только усугубляться с появлением состояний, препятствующих заживлению раны, таких как поскольку диабет, ожирение, сосудистые расстройства растут в дополнение к ожоговым травмам (Nunan et al., 2014).

Основными задачами при лечении ран являются быстрое закрытие раны и получение функционального и эстетически удовлетворительного рубца.Для этого покрытие раны является одним из краеугольных камней лечения ран (Singer and Clark, 1999). Клиницисты могут использовать различные материалы и методы, такие как терапия антибиотиками, хирургическая санация, устройства с отрицательным давлением, раневые повязки, гипербарическая оксигенация, антимикробная терапия, биоинженерные эквиваленты кожи и факторы роста, но они имеют ограниченный успех, что иллюстрирует сложности заживления ран. Кожные трансплантаты из аллогенных или аутологических источников, реконструктивные тканевые лоскуты и искусственные заменители кожи также могут быть полезны при лечении более обширных или хронических ран (Valacchi et al., 2012). Хотя исследования продолжаются, а заменители кожи становятся все более эффективными, заживление ран остается клинической проблемой, особенно у стареющего населения (Jeschke et al., 2015, 2016). Клинические и доклинические исследования с использованием клеточной терапии постепенно внедряются в медицинскую помощь для лечения кожных ран, поскольку они могут восстанавливать/замещать поврежденную ткань здоровой тканью благодаря своей естественной способности продуцировать цитокины и молекулы, необходимые для заживления ран (Marfia и др., 2015; Маркесон и др.., 2015; Николас и др., 2016a,b).

В 1991 г. McElreavey et al. впервые выделили мезенхимальные стромальные клетки из вартоновой желеобразной части пуповины (McElreavey et al., 1991). Wharton’s Jelly является источником перинатальных мезенхимальных стволовых клеток (WJ-MSC) с уникальными свойствами как эмбриональных, так и взрослых стволовых клеток (Pirjali et al., 2013). Полученные из желе МСК Wharton обладают способностью сохранять фенотипические признаки, кинетику клеточного роста, характер клеточного цикла, in vitro пластичность многолинейной дифференцировки, апоптотический характер, нормальные кариотипоподобные внутренние свойства МСК в долгосрочных культурах in vitro (Sabapathy и другие., 2014). В нескольких исследованиях изучалась клеточная терапия с помощью WJ-MSC, отдельно или в каркасе (Azari et al., 2011; Shohara et al., 2012; Fong et al., 2014; Ribeiro et al., 2014; Sabapathy et al., 2014). Исследования выявили роль WJ-MSCs для различных применений, таких как неврологические расстройства (Shalitin et al., 2003), повреждение почек (Du et al., 2013), повреждение легких (Moodley et al., 2009), печень лечение травм и рака (Sabapathy et al., 2014). Недавно мы сообщили, что кондиционированная среда WJ-MSC с ее секретомом оказывает положительное влияние на заживление ран in vitro (Arno et al., 2014).

Мезенхимальные стволовые клетки в Вартоновом желе находятся в тесном взаимодействии со своим внеклеточным матриксом. Учитывая, что секретом WJ-MSCs усиливает заживление ран in vitro , мы спросили, оказывает ли нативный внеклеточный матрикс этих клеток, который не обязательно секретируется WJ-MSC, какой-либо эффект на заживление кожи. Желе Уортона само по себе без клеток не исследовалось в отношении заживления ран. Желе Уортона содержит значительное количество компонентов внеклеточного матрикса, состоящих в основном из коллагена, гиалуроновой кислоты и различных сульфатированных протеогликанов.Хорошо известно, что биосинтез компонентов внеклеточного матрикса усиливается несколькими пептидными факторами роста, в основном инсулиноподобным фактором роста (IGF) (Edmondson et al., 2003), фактором роста фибробластов (FGF) (Yu et al., 2003). ) и трансформирующий фактор роста b (TGF-b) (Шалитин и др., 2003). Эти факторы роста могут накапливаться в вартоновом желе для поддержки клеток (например, МСК). Поэтому мы предположили, что бесклеточное желеобразное желе Уортона (AGWJ) улучшает заживление кожных ран. Здесь мы сообщаем о влиянии лечения AGWJ на фибробластные клетки дермы посредством экспериментов in vitro .Затем мы провели эксперименты по заживлению ран на 8-недельных самцах мышей C57/black 6, чтобы установить эффект лечения AGWJ на раны in vivo . Полученные данные подтверждают исследование нового метода лечения заживления ран с использованием AGWJ.

Материалы и методы

Культура клеток

Пластиковая посуда для тканевых культур была приобретена у BD Falcon™ (Бедфорд, Массачусетс, США), а все среды и добавки для тканевых культур были приобретены у Wisent Inc. (Сент-Жан-Батист, QC, Канада), если не указано иное.Среда для культивирования клеток фибробластов представляла собой модифицированную по Дульбекко среду Игла с высоким содержанием глюкозы (DMEM) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) и 1% раствора антибиотика-антимикотика. Первичные фибробласты нормальной кожи человека получали из образцов кожной ткани. Кожу рассекали, чтобы удалить любой подлежащий жир из дермы, разрезали на небольшие кусочки эксплантата от 2 до 4 мм и культивировали в 10-сантиметровых чашках. Когда клетки фибробластов мигрировали из ткани на планшет, кусочки ткани удаляли.Когда фибробласты достигли 70% слияния, примерно в течение 1 недели, их трипсинизировали 0,05% трипсином для подготовки к пересеву. Фибробласты пересевали в 75 см 2 колбы для культур тканей при плотности 5000 клеток/см 2 .

Ацеллюляризация Wharton’s Jelly

Стерильные пуповины были получены в результате кесарева сечения, проведенного хирургами из отделения гинекологии и акушерства Центра медицинских наук Саннибрук после получения согласия пациенток.Шнуры средней длины 20 см разрезали пополам. Затем 10-сантиметровые половинки шнуров были разрезаны вдоль, чтобы обнажить содержимое желе Уортона. Кусочки пуповины затем промывали, погружая их в 2% раствор антибиотика/антимикотика PBS с последующим погружением их в 1% раствор антибиотика/антимикотика PBS. Затем пуповину полностью вскрывали и стерильным скальпелем соскребали желе с пуповины. Затем желе (приблизительно 5 мл) помещали в коническую пробирку на 50 мл с 20 мл полной среды 1× DMEM и энергично ресуспендировали с помощью пипетки на 5 мл для разделения желе.Затем ресуспендированное желе в среде центрифугировали при 1400 об/мин в течение 10 мин. Клетки и остатки пуповины осаждали. Супернатант с AGWJ собирали и замораживали при -80°C. Осадок клеток отбрасывали (дополнительная фигура 1).

Исследование миграции клеток: анализ соскоба

Нормальные фибробласты кожи человека высевали в шестилуночные планшеты при плотности клеток 20000 клеток/лунку. Когда лунки достигали 100% слияния клеток, делали две царапины кончиком пипетки на 1000 мкл.Затем среду отсасывали и клетки промывали PBS. PBS был аспирационным. Одну лунку немедленно окрашивали кристаллическим фиолетовым в момент времени 0 ч. К клеткам добавляли среду для обработки AGWJ в DMEM или полную контрольную среду DMEM. Через 24 ч клетки окрашивали кристаллическим фиолетовым. Изображения были получены на микроскопе (Zeiss) с 4-кратным увеличением. На каждую царапину было сделано восемь изображений. Количественную оценку проводили с использованием программного обеспечения ImageJ (Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд, США).Клетки в зоне царапин считали клетками в зоне царапин.

In Vivo Модель для заживления ран

Восемь C57/black 6 (возраст 8 недель, самец, масса тела от 25 до 30 г) были получены из лаборатории Джексона в соответствии с рекомендациями Научно-исследовательского института Саннибрук и Комитета Саннибрук по политике и благополучию животных Университета Торонто. Процедуры для животных были рассмотрены и одобрены Исследовательским институтом Саннибрук и Центром медицинских наук Саннибрук при комитете по уходу и использованию животных Университета Торонто.Животных анестезировали, и кожные волосы на спине удаляли электробритвой под наркозом, как указано в Протоколе для животных. С каждой стороны от срединной линии создавали 4 полнослойных кожных раны диаметром 6 мм. Животные были случайным образом разделены на две группы: лечение (AGWJ и Matrigel; высококонцентрированный матрикс Corning Matrigel, продукт № 354262 Corning, NY, USA) и контроль (полная среда DMEM и Matrigel). Для 5-дневного исследования: 3 мыши получали контрольное лечение ран и 3 мыши получали лечение AGWJ.Для 7-дневного исследования: 6 мышей получали контрольное лечение и 7 мышей получали лечение AGWJ. В каждую рану местно вводили 100 мкл лечения AGWJ или контрольной DMEM в смеси Matrigel. День ранения считали 0-м днем. Для 7-дневного исследования на 2-й и 4-й дни раны перевязывали. На 6-й день, за 24 часа до увольнения мышей, животным внутрибрюшинно вводили бромдезоксиуридин (BrdU) (Calbiochem, Сан-Диего, Калифорния, США). На 5-й день раны перевязывали на 2-й день, инъецировали BrdU на 4-й день, а мышей умерщвляли на 5-й день.

Этические правила исследований на животных

Эксперименты на животных были проверены и одобрены и проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами, установленными Исследовательским институтом Саннибрук и Комитетом по политике и благополучию животных Саннибрук Health Sciences Университета Торонто, Онтарио, Канада. Все процедуры с использованием животных были одобрены комитетом по уходу за животными Sunnybrook, одобрение № 15-503 (M-1), выданное 20 ноября 2015 г. под эгидой Канадского совета по уходу за животными.

Пуповины человека были получены в результате кесарева сечения, проведенного хирургами из отделения гинекологии и акушерства Центра медицинских наук Саннибрук Университета Торонто, Торонто, Онтарио, Канада. Все субъекты дали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией принципов. Протокол был одобрен Академической сетью медицинских наук Торонто (TAHSN) и научно-исследовательским институтом Саннибрук при Университете Торонто и Советом по проверке институциональной этики Центра медицинских наук Саннибрук. пациент подписал информированное согласие.

Анализ ран

На 5-й и 7-й день мышей забивали. Затем раны иссекают с помощью скальпеля и хирургических ножниц. 3 из 4 ран помещали в гистологические кассеты и фиксировали в 10% забуференном формалине на 24 ч при 4°, затем переводили в 70% раствор этанола и затем заливали в парафин. Образцы разрезали на срезы толщиной 5 мкм. Образцы ткани разрезали по центру или срединной линии раны, обеспечивая поперечное сечение через центр раны. Затем обе половины раны помещали на предметные стекла для анализа.Раны также включали нормальную неповрежденную кожу по обе стороны от раны. Четвертая рана была заморожена сразу после иссечения для дальнейшего анализа. Для анализа ран в поле высокой мощности (HPF) грануляционная ткань была выбрана из центра раны, которая представляла собой зажившую область как в контрольной группе, так и в обработанной AGWJ ране.

Трихромный краситель

Реагенты Trichrome

были получены от EMS (Хатфилд, Пенсильвания, США), если не указано иное. Предметные стекла, залитые парафином, нагревали в течение 30 мин при 60°С.Затем предметные стекла депарафинизировали цитрозолом с последующей регидратацией через 100% × 2, 95%, 70% и промывали дистиллированной водой. Предметные стекла помещали в раствор Буэна (26367-01; EMS, Хэтфилд, Пенсильвания, США) на ночь при комнатной температуре и промывали под проточной водопроводной водой в течение 10 минут. Окрашивание гематоксилином (HHS16; Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) и раствор фуксина скарлатиновой кислоты Бибриха наносили последовательно на 10 мин. Промывки проводили после каждого добавления красителя. Препараты дифференцировали в фосфорно-вольфрамовой кислоте в течение 15 мин и переносили в анилиновый синий на 5 мин.Затем предметные стекла ополаскивали и дифференцировали в 1% уксусной кислоте в течение 2 минут, затем промывали в дистиллированной воде. Затем предметные стекла обезвоживали 95% этанолом и абсолютным этанолом с последующей очисткой в ​​цитрозоле. Предметные стекла монтировали с помощью жидкой монтажной среды SHUR/Mount на основе ксилола (Triangle Biomedical Sciences, Дарем, Северная Каролина, США). Изображения были получены с использованием светового микроскопа Zeiss Axiovert 200 при 5-кратном, 10-кратном, 20-кратном и 40-кратном увеличении. Количественную оценку проводили с использованием объединенных изображений для измерения всей длины раны.

Иммуногистохимия

Предметные стекла ткани кожи, залитые парафином, депарафинизировали нагреванием в течение 30 мин при 60°. Затем предметные стекла помещали в цитрозол (2×), 100% этанол (2×), 95% этанол, 70% этанол на 3 минуты каждый, а затем в воду. Затем выполняли извлечение антигена с использованием средства для снятия маскировки антигена (1×; Biocare Medical, Concord, CA, USA), которое добавляли к предметным стеклам в предварительно нагретой камере для снятия маскировки на 4 мин при 110°C. Для окрашивания BrdU образцы денатурировали 1,5 N HCl в течение 30 минут при 37°C и нейтрализовали 0.1 М борат дважды забуферен в течение 5 мин. Образцы блокировали 3% H 2 O 2 в течение 10 мин, а затем промывали промывочным буфером (0,05 М Трис-HCl, 0,15 М NaCl, 0,05% Tween 20 в деионизированной воде). Первичное антитело (мышиное моноклональное анти-BrdU, 1:200; Cell Signaling, Беверли, Массачусетс, США) разводили в PBS и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Для анализа α-актина гладких мышц (α-SMA) другой срез исследовали с помощью αSMA (мышиное моноклональное анти-αSMA, 1:200; клон 1A4; ebioscience, Сандиего, Калифорния, США). Первичное антитело, разведенное в PBS, инкубировали при комнатной температуре в течение 1 час.Затем предметные стекла инкубировали в течение 15 минут с мышиным зондом MACh4 (Biocare Medical), а затем с кроличьим или мышиным полимером пероксидазы хрена MACh4 с промежуточными промывками. Набор бетазоид-диаминобензидинового хромогена (Biocare Medical) смешивали и добавляли на 5 минут или до появления заметного коричневого пятна. Реакцию останавливали проточной водой. Окрашивание ядер проводили гематоксилином в течение 30 с с последующей дифференцировкой с трехкратным погружением в 1,5%-ный кислый спирт и подсиниванием в 0,1%-ный бикарбонат натрия в течение 10 с.Срезы обезвоживали 95%-ным и абсолютным этанолом до цитрозоля и монтировали с помощью SHUR/Mount. Изображения были получены с использованием светового микроскопа Zeiss Axiovert 200 при 10-кратном увеличении для изображения всего среза с последующим 40-кратным увеличением для дальнейшего фокусирования на краях и центре раны. Изображения с 40-кратным увеличением количественно определяли по положительным клеткам с использованием программного обеспечения ImageJ, а затем нормализовали к общему количеству клеток в поле 40-кратного увеличения.

Иммунофлуоресценция

Клетки

промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) и фиксировали в течение 15 мин в 4% параформальдегиде (Alfa Aesar, Карлсруэ, Германия).Фиксированные клетки промывали в PBS и пермеабилизировали в течение 10 мин 0,5% раствором Triton X-100 в PBS. Клетки снова промывали и затем блокировали в течение 30 мин 1% бычьим сывороточным альбумином в 0,5% тритоне Х-100 в PBS. Добавляли первичное антитело мышиное моноклональное αSMA (анти-αSMA, 1:200; клон 1A4; ebioscience, Сандиего, Калифорния, США) и инкубировали в течение ночи при 4°C. После промывания PBS вторичное антитело добавляли в 1% бычьего сывороточного альбумина в 0,5% Triton X-100 в PBS и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре в темноте (Alexa Fluor 488 ослиный антимышиный, 1:500; Life Technologies, Юджин, Орегон, США).Затем клетки трижды промывали PBS, предметные стекла помещали в среду для заливки Vectashield с 4′,6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Клетки исследовали и фотографировали с использованием системы флуоресцентной визуализации Apotome Axiovert при 10-кратном увеличении (Zeiss, Оберкохен, Германия). Делали четыре изображения на лунку, и визуализировали две лунки, одна лунка представляла собой клетки, обработанные AGWJ, и одна лунка представляла собой контрольные обработанные клетки.

Анализ жизнеспособности клеток

Жизнеспособность клеток определяли с использованием набора для анализа люминесцентной жизнеспособности клеток CellTiter-glo (G7571 Promega, Мэдисон, Висконсин, США).Вкратце, клетки высевали в 96-луночный планшет и оставляли расти в течение 24 часов при 37°C в инкубаторе с 5% CO2. Через 24 ч среду отсасывали и к клеткам добавляли среду для обработки AGWJ или контрольную среду. Планшет снова инкубировали в течение 24 ч в инкубаторе. После 24-часовой инкубации с обработкой субстрат титра клеток glo добавляли к буферу, а затем добавляли в планшет. Раствор клеточного титра glo добавляли в соотношении 1:1 к объему среды в лунках. Планшет встряхивали для смешивания раствора со средой, а затем инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре.После этого люминесценцию считывали с помощью гибридного многорежимного ридера микропланшетов Synergy h5 (100 Tigan Street Winooski, VT, USA).

Препарат клеточного лизата

Лизаты клеток готовили на льду. Среду отсасывали из клеток. Клетки промывали PBS, затем PBS отсасывали. Затем к клеткам добавляли буфер для лизиса (RIPA) с 5 мМ ЭДТА, 1× ингибитором протеазы и ингибитором фосфатазы. 150 мкл буфера для лизиса добавляли в 10-сантиметровый планшет с клетками. Клетки соскребали с планшета клеточным скребком.Раствор помещали в пробирку Эппендорфа и инкубировали на льду в течение 30 мин, встряхивая каждые 10 мин. Затем клеточный лизат центрифугировали при 4°С в течение 30 мин при 20000×g. Супернатант собирали в пробирку Эппендорф и хранили при -80°С.

Вестерн-блот-анализ

Вкратце, клеточные лизаты (15 мкг белка на лунку) разделяли в 10% геле SDS-PAGE, затем белки переносили на нитроцеллюлозную мембрану, после чего блоты блокировали 5% обезжиренным молоком в буфере TBST.Блоты трижды промывали буфером TBST, а затем блоты исследовали с использованием мышиного моноклонального αSMA (анти-αSMA, 1:1000; клон 1A4; ebioscience, Сандиего, Калифорния, США), мышиного моноклонального виментина (анти-виментин, 1:1000). ; Thermofisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). В качестве контроля загрузки использовали GAPDH (анти-GAPDH, 1:5000, Cell Signaling, Danvers MA, США). Первичные антитела инкубируют в течение ночи при 4°С. Интенсивность полос определяли, нормализовали и определяли количественно с помощью программного обеспечения Chemidoc и Image Lab 5.0 (Bio-Rad Laboratories).

Статистический анализ

Статистические сравнения между группой, получавшей AGWJ, и контрольной группой были выполнены с использованием двустороннего критерия Стьюдента t для анализа. Значение P <0,05 считалось статистически значимым. Данные были графически представлены как среднее значение целевой группы ± 95% доверительный интервал. Для анализа данных использовался Microsoft Excel.

Результаты

Лечение AGWJ улучшает заживление ран у мышей

Чтобы проверить, есть ли какие-либо положительные эффекты AGWJ на ускорение заживления ран in vivo , мы провели два исследования заживления ран на мышиной модели.Мы провели 5-дневное и 7-дневное точечное исследование. Длину раны и, следовательно, закрытие раны анализировали с помощью окрашивания трихомами иссеченных ран после окончания обоих исследований. Результаты показали, что через 5 дней по сравнению с контрольным лечением (рис. 1А) лечение AGWJ привело к значительному уменьшению размера раны (рис. 1В). Длину раны измеряли от края интактной кожи справа через ложе раны до интактной кожи слева от раны. Все раны были измерены, и средняя длина ран для контрольных обработанных ран составила 4184.09 мкм ± 358,18, а для ран, обработанных AGWJ, средняя длина раны составила 2673,53 мкм ± 379,02. * P <0,05 (рис. 1С). Для 7-дневного периода лечения результаты также показывают резкое сокращение длины раны при лечении AGWJ по сравнению с контролем, однако данные не показывают значимости (рис. 1D-F). Эти результаты показывают, что лечение AGWJ способствует ускоренному заживлению ран, наблюдаемому за счет более короткой длины раны и, следовательно, более быстрого закрытия раны в фазе пролиферации заживления кожи у молодых мышей.

Рисунок 1. Влияние лечения AGWJ на заживление ран in vivo через 5 дней и 7 дней . Длину раны оценивали с помощью окрашивания трихромом. (A) Репрезентативное изображение, показывающее длину контрольной раны после 5-дневного исследования заживления раны. (B) Репрезентативная рана, обработанная AGWJ, демонстрирующая заживление в конце 5 дней. (C) Количественный анализ результатов окрашивания трихромом сравнивает длину ран между контрольной группой и ранами, обработанными AGWJ. (D) Репрезентативное изображение, показывающее длину контрольной раны после 7-дневного исследования заживления ран. (E) Репрезентативная рана, обработанная AGWJ, демонстрирующая заживление в конце 7 дней. (F) Количественный анализ результатов окрашивания трихромом сравнивает длину ран между контрольной группой и ранами, обработанными AGWJ. Показанные данные представляют собой средние ± 95% доверительный интервал. P <0,05 по сравнению с контролем. N = 3 для AGWJ и N = 3 для контрольных мышей, получавших 5-дневное исследование. N = 6 для контрольных мышей для 7-дневного исследования, N = 3 для обработанных мышей, каждый N представляет одно животное. Черная стрелка показывает границу раны и неповрежденной кожи. *Указывает значимость p <0,05 по сравнению с контролем.

Лечение AGWJ не влияет на пролиферацию клеток или жизнеспособность клеток фибробластов

В попытке установить механизм улучшения заживления ран, наблюдаемого у мышей после лечения ран AGWJ, мы стремились определить, влияет ли лечение AGWJ на пролиферацию клеток в ране.Чтобы исследовать это, мы количественно определили общее количество клеток в центре раневого ложа в поле высокого увеличения (20-кратное увеличение). Результаты не показали существенной разницы в количестве клеток между контрольными обработанными (дополнительная фигура 2A) и обработанными AGWJ ранами (дополнительная фигура 2B) в течение 5 дней (дополнительная фигура 2C). На 7-й день результаты, полученные для контрольных обработанных ран (дополнительная фигура 2D) и ран, обработанных AGWJ (дополнительная фигура 2E), также не показали значительной разницы (дополнительная фигура 2F), что позволяет предположить, что AGWJ не влияет на клеточность ран.Несколько факторов влияют на клеточность тканей, включая скорость пролиферации. Сначала мы измерили жизнеспособность клеток in vitro в фибробластах человека, подвергнув клетки воздействию AGWJ и контрольной среды. Результаты не показали существенной разницы в жизнеспособности между AGWJ и контрольными клетками (дополнительная фигура 3). Чтобы проверить состояние пролиферации клеток в грануляционной ткани in vivo , мы также проанализировали экспрессию BrdU с помощью анализа IHC. Положительную экспрессию белка BrdU количественно оценивали по коричневому пятну в ядрах фибробластов в раневом ложе на 5-й и 7-й день.Хотя количество BrdU-положительных клеток в группе, получавшей AGWJ (рис. 2B), было немного ниже, чем в контрольной группе (рис. 2A), через 5 дней после ранения (рис. 2C) и было выше, чем в контроле, через 7 дней после ранения (рис. 2F). ), разница в результатах между AGWJ (рис. 2B, E) и контролем (рис. 2A, D) не была значительной. Таким образом, в совокупности наши результаты показывают, что AGWJ не способствует заживлению ран за счет модуляции пролиферации клеток в раневом ложе.

Рис. 2.Анализ BrdU пролиферации клеток в раневом ложе после лечения AGWJ по сравнению с контролем. (A) Репрезентативное изображение IHC, показывающее BrdU-положительные клетки в раневом ложе контрольной обработанной раны через 5-дневный момент времени. (B) BrdU-положительные клетки в ране, обработанной AGWJ, через 5 дней. (C) Количественное определение BrdU-позитивных клеток в раневом ложе после лечения AGWJ в течение 5 дней по сравнению с контрольным лечением. На графике показан процент BrdU-положительных клеток в поле зрения при большом увеличении (40×). (D) Репрезентативное изображение IHC, показывающее BrdU-положительные клетки в раневом ложе контрольной обработанной раны через 7 дней. (E) BrdU-положительные клетки в ране, обработанной AGWJ, через 7 дней. (F) Количественное определение BrdU-позитивных клеток в раневом ложе после лечения AGWJ в течение 7 дней по сравнению с контрольным лечением. На графике показан процент BrdU-положительных клеток в поле зрения при большом увеличении (40×). Показанные данные представляют собой средние ± 95% доверительный интервал. Для 7-дневного исследования N = 7 для мышей, получавших AGWJ, и N = 6 для контрольных мышей.Для 5-дневного исследования N = 3 для AGWJ и N = 3 для контрольных мышей. Каждый N представляет одно животное. Черные стрелки указывают на BrdU-положительные ядра, окрашенные в коричневый цвет, а наконечники стрелок указывают на BrdU-отрицательные синие ядра.

В отличие от пролиферации, AGWJ усиливает миграцию фибробластов

Поскольку наш анализ ран in vivo показал, что ускоренное заживление ран после лечения AGWJ не было связано с пролиферацией клеток в раневом ложе, мы исследовали возможность усиленной миграции клеток, вызывающей более быстрое закрытие раны.Миграция клеток является важным этапом при заживлении кожи (Amini-Nik et al., 2011, 2014). Чтобы проверить влияние лечения AGWJ на движение клеток при заживлении ран, миграцию клеток анализировали in vitro путем проведения анализа царапин. Использовали фибробласты человека, поскольку они являются основным клеточным компонентом дермы. В сливной лунке фибробластов были сделаны две горизонтальные царапины, и была добавлена ​​либо контрольная среда, либо обработка AGWJ. Изображения были сделаны в т = 0 ч и т = 24 ч (рис. 3А).Через 24 часа мы количественно оценили инфильтрацию клеток в зоне царапин и наблюдали значительно большее количество клеток в зоне царапин для царапин, обработанных AGWJ, по сравнению с контролем. Для контрольных обработанных клеток в зону царапины мигрировало в среднем 58,85 ± 22,95 фибробластов, для AGWJ в царапину мигрировало в среднем 117,33 ± 22,86 клеток ( n = 3 контроля и n = 3 AGWJ, ** p <0,01) (рис. 3B). Следовательно, как показано на рисунке 3A, клетки фибробластов, обработанные AGWJ, начали закрывать рану через 24 часа, тогда как контрольные клетки имели минимальную миграцию в зону царапин.Таким образом, обработка фибробластов AGWJ повышает их миграционную способность. Мы также наблюдали, что лечение AGWJ изменило клеточную морфологию фибробластов. Через 24 часа фибробласты приобретали более удлиненный фенотип по сравнению с клетками, обработанными контрольной средой.

Рисунок 3. Анализ миграции клеток in vitro для фибробластов. (A) На верхней панели показаны репрезентативные изображения обработанной контрольной царапины в момент времени 0 часов по сравнению с обработанной контрольной царапиной через 24 часа.На нижней панели показан анализ царапин фибробластов с обработкой AGWJ в момент времени 0 ч, а затем визуализирована зона царапин после инкубации с AGWJ в течение 24 часов. (B) На графике показано среднее количество клеток фибробластов, которые проникли в зону царапин через 24 часа для клеток, обработанных контрольной средой, по сравнению с клетками, обработанными AGWJ. ** Указывает значимость p <0,01 по сравнению с контролем.

Лечение AGWJ способствует развитию миофибробластического фенотипа

In Vitro

Поскольку мы обнаружили меньший размер ран в обработанных AGWJ ранах in vivo , а наши результаты in vitro продемонстрировали усиленную миграцию клеток после лечения AGWJ, наши результаты подтверждают мнение о том, что AGWJ увеличивает миграцию клеток.И эта улучшенная миграция клеток является основным механизмом более быстрого заживления ран. Более того, как уже упоминалось, мы наблюдали изменение фенотипа клеток, обработанных AGWJ in vitro , и меньший размер раны in vivo , оба из которых указывают на промиофибробластический фенотип из-за предшествующего лечения AGWJ, что привело к к более быстрому сокращению, что характерно для ускоренного заживления ран. Чтобы оценить это in vitro , мы обработали фибробласты AGWJ или контрольной средой и с помощью иммунофлуоресцентного анализа наблюдали, что белок αSMA резко увеличился в фибробластах после обработки AGWJ (рис. 4B) по сравнению с обработанными контрольными клетками (рис. 4A).Этот результат был подтвержден вестерн-блот-анализом, который обнаружил значительно более высокий уровень экспрессии белка αSMA в фибробластах, обработанных AGWJ, для двух разных образцов фибробластов человека (рис. 4C). Вестерн-блот-денситометрия для αSMA была нормализована к GAPDH, и количественная оценка показывает почти 8-кратное увеличение уровней белка αSMA после обработки AGWJ по сравнению с контрольной средой DMEM (рис. 4D). Кроме того, нормальные фибробласты человека демонстрируют высокий уровень виментина, который снижается после обработки AGWJ в течение 24 часов, что наблюдается в двух разных образцах фибробластов человека с помощью вестерн-блоттинга (дополнительная фигура 4).

Рисунок 4. Лечение AGWJ способствует развитию миофибробластного фенотипа in vitro , обнаруженного по экспрессии αSMA. (A) Иммунофлуоресцентное изображение фибробластов, обработанных контрольной средой, по сравнению с фибробластами, обработанными (B) AGWJ, после 24 часов обработки. Синяя флуоресценция DAPI представляет собой ядро, а красный родамин представляет собой αSMA. (C) Вестерн-блот-анализ двух нормальных клеток фибробластов человека (Hu-Fibro), обработанных либо контрольной средой DMEM, либо обработкой AGWJ в течение 24 часов для анализа экспрессии белка αSMA.Контроль загрузки представлял собой белок GAPDH. (D) Денситометрический анализ вестерн-блоттинга. Экспрессию белка αSMA нормализовали по GAPDH.

AGWJ усиливает дифференцировку фибробластов в миофибробласты в раневом ложе

Поскольку мы обнаружили повышенный уровень αSMA в фибробластах in vitro , что является характеристикой миофибробластов, мы хотели исследовать, будет ли этот результат транслироваться in vivo . Иммуногистохимический анализ αSMA в ранах, иссеченных в моменты времени 5 и 7 дней, показывает, что для момента времени 5 дней; раны, обработанные AGWJ, экспрессируют более высокие уровни αSMA (фиг. 5B), тогда как контрольные раны экспрессируют αSMA очень мало или вообще не экспрессируют (фиг. 5A).Удивительно, но напротив, на 7-й день мы обнаружили, что раневые ложа как для лечения AGWJ (рис. 5D), так и для контрольного лечения (рис. 5C) выражали высокие уровни αSMA. Следовательно, оказывается, что AGWJ ускоряет процесс заживления ран за счет более ранней дифференцировки фибробластов в миофибробласты, как видно на 5-й день, и, следовательно, укорачивает фазу пролиферации заживления кожных ран.

Рисунок 5. Влияние лечения AGWJ на экспрессию αSMA в раневом ложе in vivo .(A) Экспрессия αSMA в грануляционной ткани контрольных обработанных ран через 5 дней. (B) Экспрессия αSMA в грануляционной ткани ран, обработанных AGWJ, через 5 дней. (C) Экспрессия αSMA в грануляционной ткани контрольных обработанных ран через 7 дней. (D) Экспрессия αSMA в грануляционной ткани обработанных AGWJ ран через 7 дней.

Обсуждение

Имеется значительное количество литературы, в которой исследуются положительные эффекты клеточной терапии с использованием МСК WJ, отдельно или в составе каркаса (Zebardast et al., 2010; Азари и др., 2011; Шохара и др., 2012 г.; Арно и др., 2014; Фонг и др., 2014 г.; Рибейро и др., 2014; Сабапати и др., 2014). Появляющиеся сообщения показывают многообещающую роль децеллюляризованных биологических матриц для восстановления тканей (Boccafoschi et al., 2015). Наша группа сообщила, что кондиционированная среда WJ-MSC оказывает положительное влияние на заживление ран у человека in vivo в эксцизионных ранах на всю толщину кожи на мышиной модели посредством паракринной передачи сигналов с помощью нескольких механизмов: усиление экспрессии генов факторов заживления ран, такие как TGF-ß2, HIF-1α и PAI-1, в дополнение к усилению пролиферации и миграции фибробластов кожи человека (Arno et al., 2014). Известно, что ниша или микроокружение стволовых клеток имеет решающее значение для поддержки МСК и что между клетками и окружающей средой происходят значительные перекрестные помехи и передача сигналов (Boccafoschi et al., 2015; Khodadi et al., 2016). Кроме того, в вартоновом желе находится секретом стволовых клеток. Сообщается, что в дополнение к тому, что он является резервуаром МСК, Wharton’s Jelly является отличным источником факторов, способствующих ангиогенезу и заживлению ран, таких как IGF-1, TGF-ß1, VEGF, PDGF, EGF, bFGF, HGF, IL. -6 и ИЛ-8 (Соболевский и др., 2005; Лю и др., 2012; Арно и др., 2014; Биазар, 2014; Эдвардс и др., 2014). Эти факторы, как полагают, также стимулируют клетки внутри Wharton’s Jelly к продукции большого количества компонентов ECM (Sobolewski et al., 2005). Поскольку AGWJ присутствует в нативной нише МСК и поддерживает эти стволовые клетки, помимо того, что он является источником факторов заживления ран, мы предположили, что AGWJ оказывает благотворное влияние на заживление кожных ран. Поэтому мы выделили желе Уортона и ацеллюляризировали его (дополнительная фигура 1).В пуповине неизвестно, способствует ли AGWJ поведению стволовых клеток и поддерживает ли эти MSCs в их нише, или другие типы клеток вносят вклад в микроокружение и, следовательно, влияют на поведение стволовых клеток.

Результаты этого исследования показали, что AGWJ приводит к заживлению в более ранний момент времени на мышиной модели, продемонстрировав значительное сокращение длины раны после лечения AGWJ по сравнению с контрольным лечением через 5 дней. Мы выбрали 5 дней и 7 дней в качестве временных точек для этого исследования, потому что в мышиной модели 5-й день считается пиком фазы пролиферации, а 7-й день — началом фазы созревания раны при заживлении ран (Bielefeld et al., 2013). Несмотря на положительное влияние на заживление ран у молодых животных, о котором мы здесь сообщаем, еще предстоит определить, может ли этот эффект восстановить недостаточное заживление, наблюдаемое у пожилых пациентов или пациентов с диабетом. Необходимы дополнительные исследования для изучения их влияния на модель заживления дефектной кожи.

Мы также попытались понять механизм ускоренного заживления ран, исследуя несколько возможных механизмов, таких как жизнеспособность клеток, пролиферация клеток и миграция клеток. Мы начали с исследования клеточности в ране, подсчитав количество клеток в грануляционной ткани при HPF, а также обнаружив клеточную пролиферацию посредством окрашивания ран BrdU.Результаты не показали существенной разницы между AGWJ и контролем. Таким образом, наш анализ ран in vivo предполагает, что ускоренное заживление ран после лечения AGWJ не было связано с увеличением числа клеток. Чтобы дополнительно охарактеризовать это наблюдение in vitro , мы провели анализ жизнеспособности с использованием AGWJ и обработки контрольной средой. Пролиферация клеток может оказывать влияние на жизнеспособность клеток и, следовательно, на клеточность. Опять же, наши данные показали, что AGWJ не влияет на жизнеспособность фибробластов in vitro .В совокупности этот набор данных устанавливает, что механизм действия AGWJ заключается не в усилении пролиферации, жизнеспособности и клеточности клеток.

Затем мы исследовали возможность усиленной миграции клеток, вызывающей более быстрое закрытие раны. Подвижность и миграция клеток играют решающую роль во время заживления ран (Schneider et al., 2010; Amini-Nik et al., 2014). Действительно, наши результаты in vitro подтвердили, что AGWJ вызывает повышенную миграцию фибробластов. Кроме того, мы наблюдали изменение фенотипа фибробластных клеток, обработанных AGWJ, и меньший размер раны in vivo , оба из которых предполагают промиофибробластический фенотип.ИГХ-анализ ран на αSMA показал повышенную экспрессию αSMA в грануляционной ткани через 5 дней по сравнению с контрольными обработанными ранами. Удивительно, но через 7 дней экспрессия αSMA в контрольных и обработанных AGWJ ранах оказалась одинаковой. Это говорит о том, что AGWJ ускоряет фазу пролиферации заживления ран, вызывая более быструю дифференцировку фибробластов в миофибробласты, что подтверждается экспрессией αSMA. Контрольные раны дифференцируются в обычном порядке и наверстывают упущенное позже, через 7 дней после ранения.Этот результат был подтвержден нашим анализом in vitro фибробластов после лечения AGWJ, который показал повышенную экспрессию экспрессии белка αSMA по сравнению с контролем.

В этом отчете впервые показано, что AGWJ улучшает заживление ран, ускоряя фазу пролиферации заживления кожи, в основном за счет улучшения миграции клеток и закрытия ран. Несколько заболеваний, в том числе раны у пациентов с диабетом у пожилых пациентов, связаны с замедленным заживлением ран, и AGWJ может быть лекарством для этой группы пациентов.Хотя мы обнаружили механизм через сигнальный путь TGF-бета для положительного эффекта AGWJ на заживление кожи, еще предстоит проверить, могут ли другие факторы способствовать этому наблюдению. Будущие исследования должны быть сосредоточены на дальнейшей характеристике AGWJ и поиске активных ингредиентов, особенно для компонентов сигнальных путей, которые играют важную роль в процессе заживления кожи, таких как сигнальные пути Wnt/β-катенин, а также сигнальные пути TGF-β/Smad 2. (Амини Ник и др., 2007; Пун и др.., 2009; Билефельд и др., 2011). Поскольку AGWJ улучшает заживление ран в основном за счет миграции клеток, а не пролиферации клеток, он может быть идеальным средством для недостаточного заживления кожи, связанного с недостаточной миграцией. Недавно мы сообщили, что пожилые пациенты с ожогами имеют уменьшенный пул стволовых клеток, недостаточную миграцию MSC и измененную активацию важнейших сигнальных путей для заживления кожи (Jeschke et al., 2015). Таким образом, поскольку наши данные свидетельствуют о том, что AGWJ усиливает миграцию клеток, вызывает более раннюю дифференцировку фибробластов в миофибробласты и, следовательно, способствует более раннему сокращению раны, это лечение может иметь значительные преимущества в заживлении ран, особенно для этой группы пациентов.

Экономика AGWJ

Результаты этого исследования демонстрируют открытие AGWJ, который является очень нативным и нишевым материалом стволовых клеток внутри пуповины с целью заживления кожных ран. Набираем примерно по 5 мл студня из каждой пуповины. К этим 5 мл желе мы добавили 15 мл полной среды DMEM и повторно суспендировали желе, так что мы получили в общей сложности 20 мл раствора. Для нашего исследования in vivo на мышах мы поместили 50 мкл раствора AGWJ, смешанного с 50 мкл матригеля (1:1), на каждую рану, покрывая и усиливая 0.3 см 2 площадь раны у животного. В совокупности каждая пуповина обеспечивает материал AGWJ примерно для 115 см 2 области раны (дополнительная фигура 5). В отличие от секретома MSC, для выделения которого требуется оборудованное помещение, выделение AGWJ требует минимального оборудования и может быть выполнено в любом учреждении в развивающихся странах.

В заключение мы впервые продемонстрировали, что AGWJ улучшает заживление ран, и установили механизм его роли в качестве потенциального терапевтического средства для недостаточного заживления кожных ран.Поскольку каждая пуповина обеспечивает приблизительно достаточное количество AGWJ, чтобы покрыть 115 см 2 площади раны, ее легко изолировать, и она доступна во всем мире; Пуповина AGWJ имеет далеко идущие преимущества для заживления ран не только в развитых странах, но и в развивающихся странах, где недорогие и доступные средства для заживления ран имеют острую потребность.

Вклад авторов

NB, MJ и SA внесли существенный вклад в разработку концепции и дизайна, сбор данных, анализ и интерпретацию данных для этого исследования.NB и SA отвечали за создание модели ран животных, а с помощью LM эти авторы отвечали за организацию, анализ и интерпретацию данных in-vivo . NB провела культивирование клеток и экспериментов in vitro . LM провел анализ данных вслепую. Э.Г. провел операции по получению пуповины для исследования. SA и NB внесли свой вклад в написание рукописи и внесение изменений. Все авторы дали согласие на публикацию этой версии рукописи.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Г-жа Дженнифер Хе, г-жа Андреа Кей Дату и финансирующие агентства Toronto Hydro and Medicine by Design-Seed грант (премия EMHSeed, 16 февраля 2016 г.).

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/article/10.3389/fphys.2017.00200/full#supplementary-material

Дополнительный рисунок 1. Децеллюляризация желе Уортона . Степень децеллюляризации вартонова студня оценивали с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания ядер DAPI. На первой панели показан полный WJ до децеллюляризации с большим количеством клеток, на второй панели показан AGWJ без каких-либо клеток.

Дополнительный рисунок 2. Влияние лечения AGWJ на клеточность раневого ложа. (A) Анализ окрашивания трихом , использованный для количественного определения количества клеток в центре раны. (A) Репрезентативное изображение, показывающее клеточность раневого ложа после 5 дней контрольного лечения. (B) Изображение, показывающее клеточность ложа раны после лечения AGWJ через 5 дней. (C) Количественное определение среднего количества клеток в ложе раны при сравнении контрольных обработанных ран с обработанными AGWJ ранами через 5 дней. (D) Репрезентативное изображение, показывающее клеточность раневого ложа после 7 дней контрольного лечения. (E) Изображение, показывающее клеточность ложа раны после лечения AGWJ через 7 дней. (F) Количественное определение среднего количества клеток в ложе раны, сравнивающее контрольные обработанные раны с обработанными AGWJ ранами после 7-дневного лечения. На графике показано среднее количество клеток в ложе раны в контроле по сравнению с мышами, получавшими AGWJ, при 20-кратном увеличении. Показанные данные представляют собой средние ± 95% доверительный интервал. Для 7-дневного исследования N = 7 для мышей, получавших AGWJ, и N = 6 для контрольных мышей, каждый n представляет одно животное. Для 5-дневного исследования N = 3 для AGWJ и N = 3 для контрольных мышей.

Дополнительный рисунок 3. AGWJ не влияет на жизнеспособность фибробластов in vitro . Количественный анализ жизнеспособности клеток после контроля и обработки AGWJ в течение 24 часов. Люминесценцию считывали с помощью гибридного многорежимного считывателя микропланшетов Synergy h5.

Дополнительная фигура 4. Лечение AGWJ снижает экспрессию виментина в фибробластах . Вестерн-блот анализ двух нормальных клеток фибробластов человека (Hu-Fibro), обработанных либо контрольной средой DMEM, либо обработкой AGWJ в течение 24 часов.Контроль загрузки представлял собой белок GAPDH.

Дополнительный рисунок 5. Схема, иллюстрирующая процедуру выделения AGWJ и последующее экономное использование AGWJ в качестве средства для заживления ран .

Ссылки

Amini-Nik, S., Cambridge, E., Yu, W., Guo, A., Whetstone, H., Nadesan, P., et al. (2014). Адгезия и миграция миелоидных клеток, регулируемая β-катенином, определяют заживление ран. Дж. Клин. Вкладывать деньги. 124, 2599–2610. DOI: 10.1172/JCI62059

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Амини Ник, С., Эбрахим, Р.П., Ван Дам, К., Кассиман, Дж.Дж., и Тейпар, С. (2007). TGF-бета модулирует стабильность бета-катенина и передачу сигналов при мезенхимальной пролиферации. Экспл. Сотовый рез. 313, 2887–2895. doi: 10.1016/j.yexcr.2007.05.024

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Амини-Ник, С., Глэнси, Д., Боймер, К., Уэтстоун, Х., Келлер, К., Алман, Б., и др. (2011). Клетки, экспрессирующие Pax7, способствуют заживлению кожных ран, регулируя размер рубца посредством процесса, опосредованного бета-катенином. Стволовые клетки 29, 1371–1379. doi: 10.1002/стел.688

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Арно, А.И., Амини-Ник, С., Блит, П.Х., Аль-Шехаб, М., Бело, К., Херер, Э., и соавт. (2014). Влияние паракринной передачи сигналов мезенхимальных стволовых клеток Wharton’s желе человека на келоидные фибробласты. Стволовые клетки Перевод. Мед. 3, 299–307. doi: 10.5966/sctm.2013-0120

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Атие, Б.С., Иоаннович Дж., Аль-Амм К.А. и Эль-Муса К.А. (2002). Лечение острых и хронических открытых ран: важность влажной среды для оптимального заживления ран. Курс. фарм. Биотехнолог. 3, 179–195. дои: 10.2174/1389201023378283

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Азари О., Бабаи Х., Дерахшанфар А., Нематоллахи-Махани С. Н., Пурсахеби Р. и Мошрефи М. (2011). Влияние трансплантированных мезенхимальных стволовых клеток, выделенных из вартонова желе пуповины козы, на заживление кожных ран; гистопатологическая оценка. Вет. Рез. коммун. 35, 211–222. doi: 10.1007/s11259-011-9464-z

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Биазар, Э. (2014). Использование стволовых клеток пуповины и пуповинной крови для восстановления и регенерации тканей. Экспертное заключение. биол. тер. 14, 301–310. дои: 10.1517/14712598.2014.867943

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Билефельд, К. А., Амини-Ник, С., и Алман, Б. А. (2013). Заживление кожных ран: задействование путей развития для регенерации. Сотовый. Мол. Жизнь наук. 70, 2059–2081. doi: 10.1007/s00018-012-1152-9

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Билефельд, К. А., Амини-Ник, С., Уэтстоун, Х., Пун, Р., Юн, А., Ван, Дж., и соавт. (2011). Фибронектин и бета-катенин действуют в регуляторной петле в дермальных фибробластах, модулируя заживление кожи. Дж. Биол. хим. 286, 27687–27697. doi: 10.1074/jbc.M111.261677

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Боккафоски, Ф., Ботта М., Фузаро Л., Копес Ф., Рамелла М. и Каннас М. (2015). Децеллюляризованные биологические матрицы: интересный подход к восстановлению и регенерации сердечно-сосудистой ткани. J. Tissue Eng. Реген. Мед. doi: 10.1002/term.2103. [Epub перед печатью].

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Брански Л.К., Гауглиц Г.Г., Херндон Д.Н. и Йешке М.Г. (2009). Обзор генной терапии и терапии стволовыми клетками при заживлении кожных ран. Бернс 35, 171–180.doi: 10.1016/j.burns.2008.03.009

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Du, T., Zou, X., Cheng, J., Wu, S., Zhong, L., Ju, G., et al. (2013). Желеобразные мезенхимальные стромальные клетки Wharton человека уменьшают почечный фиброз посредством индукции синтеза нативных и чужеродных факторов роста гепатоцитов в поврежденных эпителиальных клетках канальцев. Рез. стволовых клеток. Тер 4:59. дои: 10.1186/scrt215

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эдмондсон, С.Р., Тумигер С.П., Вертер Г.А. и Райт С.Дж. (2003). Эпидермальный гомеостаз: роль систем гормона роста и инсулиноподобного фактора роста. Эндокр. Ред. 24, 737–764. doi: 10.1210/er.2002-0021

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эдвардс С.С., Завала Г., Прието С.П., Эллиотт М., Мартинес С., Эганья Дж.Т. и др. (2014). Функциональный анализ выявил ангиогенный потенциал мезенхимальных стволовых клеток человека из вартонова желе в регенерации дермы. Ангиогенез 17, 851–866. doi: 10.1007/s10456-014-9432-7

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фонг С.Ю., Там К., Чейятрайвендран С., Ган С.У., Гаутхаман К., Армугам А. и соавт. (2014). Желейные стволовые клетки человека Wharton и их кондиционированная среда улучшают заживление эксцизионных и диабетических ран. Дж. Сотовый. Биохим. 115, 290–302. doi: 10.1002/jcb.24661

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Йешке, М.Г., Пацурис Д., Станойчич М., Абдуллахи А., Рехоу С., Пинто Р. и соавт. (2015). Патофизиологическая реакция на ожоги у пожилых. EBioMedicine 2, 1536–1548. doi: 10.1016/j.ebiom.2015.07.040

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Йешке, М. Г., Пинто, Р., Костфорд, С. Р., и Амини-Ник, С. (2016). Пороговый возраст и размер ожога связаны с неблагоприятными исходами у пожилых людей после ожоговой травмы. Бернс 42, 276–281. doi: 10.1016/j.горит.2015.12.008

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ходади, Э., Шахраби, С., Шахджахани, М., Азанде, С., и Саки, Н. (2016). Роль фактора стволовых клеток в плацентарной нише. Рез. клеточной ткани. 366, 523–531. doi: 10.1007/s00441-016-2429-3

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лю С., Юань М., Хоу К., Чжан Л., Чжэн С., Чжао Б. и др. (2012). Иммунная характеристика мезенхимальных стволовых клеток в желе Уортона пуповины человека и производных хрящевых клеток. Сотовый. Иммунол. 278, 35–44. doi: 10.1016/j.cellimm.2012.06.010

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Марфия Г., Навоне С.Е., Ди Вито К., Уги Н., Табано С., Миоццо М. и др. (2015). Мезенхимальные стволовые клетки: возможности терапии и лечения хронических незаживающих кожных ран. Органогенез 11, 183–206. дои: 10.1080/15476278.2015.1126018

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Маркесон, Д., Плит, Дж. М., Шарп, Дж. Р., Харрис, А. Л., Сейфалиан, А. М., и Ватт, С. М. (2015). Рубцевание, стволовые клетки, каркасы и восстановление кожи. J. Tissue Eng. Реген. Мед. 9, 649–668. doi: 10.1002/term.1841

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

McElreavey, K.D., Irvine, A.I., Ennis, K.T., and McLean, W.H. (1991). Выделение, культивирование и характеристика фибробластоподобных клеток, полученных из вартоновой желеобразной части пуповины человека. Биохим. соц. Транзакция. 19:29с. дои: 10.1042/bst019029s

Реферат PubMed | Полнотекстовая перекрестная ссылка

Moodley, Y., Atienza, D., Manuelpillai, U., Samuel, C.S., Tchongue, J., Ilancheran, S., et al. (2009). Мезенхимальные стволовые клетки пуповины человека уменьшают фиброз вызванного блеомицином повреждения легких. утра. Дж. Патол. 175, 303–313. doi: 10.2353/ajpath.2009.080629

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Николай, М.Н., Йешке М. Г. и Амини-Ник С. (2016a). Клеточный двухслойный пуллулан-желатиновый гидрогель для регенерации кожи. Ткань англ. Часть А 22, 754–764. doi: 10.1089/ten.tea.2015.0536

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Нунан, Р., Хардинг, К.Г., и Мартин, П. (2014). Клинические проблемы хронических ран: поиск оптимальной животной модели для воспроизведения их сложности. Дис. Модели Механ. 7, 1205–1213. doi: 10.1242/dmm.016782

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пирджали, Т., Азарпира, Н., Аятоллахи, М., Агдаи, М. Х., Герамизаде, Б., и Талаи, Т. (2013). Выделение и характеристика мезенхимальных стволовых клеток человека, полученных из вартонова желе пуповины человека и амниотической мембраны. Междунар. Дж. Пересадка органов. Мед. 4, 111–116.

Реферат PubMed | Академия Google

Пун Р., Ник С. А., Ан Дж., Слэйд Л. и Алман Б. А.(2009). Бета-катенин и бета-трансформирующий фактор роста играют различную роль в регуляции подвижности фибробластов и индукции сокращения решетки коллагена. BMC Cell Biol. 10:38. дои: 10.1186/1471-2121-10-38

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ribeiro, J., Pereira, T., Amorim, I., Caseiro, A.R., Lopes, M.A., Lima, J., et al. (2014). Клеточная терапия МСК человека, выделенных из пуповинного студня, ассоциированного с мембраной ПВА, при лечении хронических кожных ран. Междунар. Дж. Мед. науч. 11, 979–987. doi: 10.7150/ijms.9139

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сабапати, В., Сундарам, Б., В.М.С., Манкужи, П., и Кумар, С. (2014). Пластичность мезенхимальных стволовых клеток Human Wharton Jelly способствует заживлению кожных ран без шрамов и росту волос. PLoS ONE 9: E 93726. doi: 10.1371/journal.pone.0093726

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шнайдер, Л., Cammer, M., Lehman, J., Nielsen, S.K., Guerra, C.F., Veland, I.R., et al. (2010). Направленная миграция клеток и хемотаксис при заживлении ран в ответ на PDGF-AA координируются первичной ресничкой в ​​фибробластах. Клеточная физиол. Биохим. 25, 279–292. дои: 10.1159/000276562

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шалитин Н., Шлезингер Х., Леви М.Дж., Кесслер Э. и Кесслер-Айсексон Г. (2003). Экспрессия энхансера проколлагена С-протеиназы в культивируемых фибробластах сердца крысы: свидетельство совместной регуляции с коллагеном I типа. Дж. Сотовый. Биохим. 90, 397–407. doi: 10.1002/jcb.10646

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шохара Р., Ямамото А., Такикава С., Ивасе А., Хиби Х., Киккава Ф. и др. (2012). Мезенхимальные стромальные клетки вартонова студня пуповины человека ускоряют заживление ран за счет паракринных механизмов. Цитотерапия 14, 1171–1181. дои: 10.3109/14653249.2012.706705

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Соболевский, К., Малковски А., Банковски Э. и Яворски С. (2005). Желе Уортона как резервуар пептидных факторов роста. Плацента 26, 747–752. doi: 10.1016/j.placenta.2004.10.008

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Валаччи Г., Занарди И., Стикоцци К., Боччи В. и Травальи В. (2012). Новые темы в лечении кожных ран. Энн. Академик Нью-Йорка науч. 1259, 136–144. doi: 10.1111/j.1749-6632.2012.06636.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ю, К., Wang, F., Jin, C., Huang, X., Miller, D.L., Basilico, C., et al. (2003). Роль фактора роста фибробластов 1 и 2 типа в индуцированном четыреххлористым углеродом повреждении печени и фиброгенезе. утра. Дж. Патол. 163, 1653–1662. doi: 10.1016/S0002-9440(10)63522-5

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Зебардаст, Н., Ликориш, Д., и Дэвис, Дж. Э. (2010). Периваскулярные клетки пуповины человека (HUCPVC): источник мезенхимальных клеток для заживления кожных ран. Органогенез 6, 197–203. doi: 10.4161/org.6.4.12393

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хронические раны, излечиваемые стволовыми клетками пуповины

Возможно, вскоре мы изменим наше представление о ранах и способах их заживления благодаря исследованиям по использованию стволовых клеток пуповины для лечения хронических ран.

Банк пуповинной крови в настоящее время является привычным вариантом для молодых родителей, желающих защитить свою семью от таких заболеваний, как лейкемия, серповидно-клеточная анемия и лимфома.Однако пуповинная кровь — не единственный источник стволовых клеток новорожденных.

Biovault Family хранит ткань пуповины, а также стволовые клетки пуповинной крови, потому что сама пуповина является богатым источником МСК: мезенхимальных стволовых клеток, ответственных за рост и восстановление тканей организма, таких как мышцы, кости и сухожилия.

В настоящее время ученые начинают использовать МСК для укрепления иммунной системы, регенерации поврежденных тканей и лечения или даже предотвращения заболеваний. Теперь группа ученых из Техаса использовала ткань пуповины для улучшения заживления ран .

Что такое хроническая рана?

хроническая рана — это рана, которая не заживает в течение примерно трех месяцев, но остается на одной из фаз заживления раны. Хронические раны могут никогда не зажить, вызывая эмоциональный и физический стресс у пациентов и оказывая давление на наши службы здравоохранения.

Хронические раны возникают по ряду причин, включая нарушение кровообращения, системные заболевания, старость и повторяющиеся травмы. До сих пор лечение, как правило, ограничивалось длительным применением антибиотиков и, при необходимости, пересадкой кожи.

Стволовые клетки и раны

Стволовые клетки в ткани пуповины молодые, здоровые и могут храниться криогенно в течение десятилетий. Сочетание этих свойств означает, что они очень ценны с терапевтической точки зрения.

Было показано, что стволовые клетки пуповинной крови приводят к меньшему количеству случаев реакции «трансплантат против хозяина», поскольку молодые клетки являются особенно гибкими и адаптируемыми.

Важно отметить, что стволовые клетки пуповины не оказывают отрицательного воздействия на младенцев-доноров.Ткань пуповины можно собирать и хранить после удовлетворения потребностей матери и ребенка, что является значительным преимуществом по сравнению со сбором стволовых клеток из костного мозга.

Лечение

Врачи клиники в Темпле, штат Техас, зарегистрировали 57 пациентов, которые страдали от 64 отдельных ран. Само лечение простое: каждую рану очищают от омертвевших, поврежденных или инфицированных тканей, прежде чем закрепить образец ткани пуповины, закрепленный влажной марлей.

Обнадеживающие результаты для пациентов и медицинских служб

Для многих пациентов этот процесс повторялся еженедельно.После того, как цикл лечения был завершен, команда из Техаса обнаружила впечатляющие результаты: 51 рана — почти 80 процентов от общего числа — зажила менее чем за четыре недели. Этот общий показатель заживления ран, составляющий 79,7% , намного выше, чем любые опубликованные показатели заживления ран при стандартном лечении (приблизительно 24%), и подтверждает гипотезу ученых о том, что применение трансплантата ткани пуповины может улучшить заживление хронических ран. .

Лечение ткани пуповины, вероятно, будет менее дорогостоящим, чем традиционные методы лечения.В США лечение хронических ран оценивается более чем в 50 миллиардов долларов в год. В дополнение к затратам, связанным с медицинскими вмешательствами, такими как антибиотики и пересадка кожи, неудача в лечении влияет на способность пациента работать, что в конечном итоге приводит как к увеличению затрат на здравоохранение, так и к социально-экономическим затратам.

Клиническое использование ткани пуповины для лечения хронических ран

Врачи уже начали использовать образцы ткани пуповины для лечения ран. Доктор Эндрю Райс из отделения хирургии стопы округа Фэрфилд рассказал, как он лечил язвы стопы у пациента с диабетом с помощью ткани пуповины.Используя эту богатую стволовыми клетками ткань, доктор Райс смогла сократить режим ухода за раной одного пациента с шести месяцев до пяти недель. Райс добавил, что, по его мнению, использование пуповинных клеток на ранах также может помочь гарантировать, что эти области не будут повреждены или уязвимы после первого заживления.

Источники

Раны: Официальный журнал, 2016;28(7):217-225

Википедия: Хронические раны

Бакалавр микробиологии

Главный исполнительный директор | Biovault Family

Генеральный директор Biovault Family Кейт Снеддон присоединилась к Biovault в июле 2009 года и стала главным исполнительным директором в 2016 году.В качестве специалиста в области здравоохранения ее опыт включает работу микробиологом и руководителем в GSK более 10 лет. Ее опыт в области хранения пуповинной крови был отмечен ее наградами, статьями в «Парламентском обзоре» и «Руководстве для родителей по пуповинной крови», а также вкладом в исследования UCL и других организаций.

8 Что можно и чего нельзя делать при уходе за пуповиной – Birth Song Botanicals Co.

Ура, у вас родился ребенок! Теперь, когда вы пережали и перерезали пуповину, как вы за ней ухаживаете? Что вы делаете, чтобы высушить культю пуповины, чтобы она быстрее зажила и отпала? Посмотрите сегодняшнее видео, чтобы узнать о 8 правилах ухода за пуповиной новорожденного и о том, как ухаживать за ней естественным путем.

 

Слушайте в Sound Cloud:

Смотреть на Youtube:

 

Если это наша первая встреча, то меня зовут Мария Чоудхури, и я акушерка-травник. Как акушерка я помогла сотням младенцев благополучно родиться в домашних условиях, а как травник я создала растительные препараты Birth Song Botanicals для женщин и детей во всем мире.

 


Уход за натуральной пуповиной

Теперь, когда вы перерезали пуповину; Вы должны позаботиться об этом.Я признаю, что пупок новорожденного может показаться немного корявым и пугающим. Но не волнуйтесь! Уход за ним действительно довольно прост и прямолинеен. Сегодня я даю 8 рекомендаций по естественному и безопасному уходу за культей пуповины вашего новорожденного.

1 Пусть будет- Не придирайся и не связывайся с этим.

Культя пуповины обычно отпадает самостоятельно в течение 3-14 дней. Я знаю, что соблазнительно прикоснуться к нему, но постарайся оставить его в покое.

2 Следите за чистотой пуповины

Вы можете аккуратно протереть шнур и окружающие области чистой водой.Новорожденным действительно не нужно принимать столько ванн. Если вы не делаете ребенку послеродовую ванну с травами, предпочтительнее использовать губку. Послеродовая ванночка с травами специально разработана для восстановления сил мам и малышей после рождения. У матерей есть болезненные женские части со швами, а у новорожденных есть пуповины, которые должны высохнуть, отпасть и зажить. Наша послеродовая травяная ванна смешана с антисептическими и вяжущими травами, которые отлично борются с инфекциями и способствуют заживлению кожи. Посмотрите наши видео о послеродовом восстановлении и травяных ваннах.

 

 

 

3 Держите шнур сухим 

Проветрите шнур. Пока температура комфортная, позволяйте ребенку получать непрямой солнечный свет на живот. Солнечный свет — отличный целитель. Солнечный свет поможет высушить пуповину и даст ребенку достаточное количество витамина D, чтобы поддержать его иммунную систему и помочь перерабатывать билирубин для избавления от желтухи.

Не допускайте намокания шнура. Убедитесь, что шнур вышел из подгузника.

4 Избегайте раздражения шнура

Если вы используете тканевые подгузники, вам нужно проявить изобретательность, складывая подгузник, чтобы он не натирал обрубок пуповины. Рассмотрим одноразовые подгузники с вырезом для пуповины.

Выбирайте одежду, которая легко надевается на шнур, но при этом не слишком стягивает пупок. Избегайте комбинезонов с кнопками в области промежности и штанов, которые натирают талию.

 

5 Используйте травяной порошок для ухода за пуповиной

Травяной порошок для ухода за пуповиной представляет собой травяную смесь мирры, лаванды, корня орегонского винограда и тысячелистника.Все эти травы противомикробные, антибактериальные и противогрибковые. Они помогают шнуру высохнуть и не так неприятно пахнуть. Это нормально, когда шнур становится мокрым, источает неприятный запах. Просто посыпьте немного порошка для ухода за пуповиной по краям и основанию пуповины. Пень превратится в темный струп. Наносите порошок для ухода за пуповиной при каждой смене подгузника или когда вы замечаете, что пуповина становится влажной. Вы можете использовать ватную палочку, чтобы насыпать порошок в пупок.


Наш порошок для ухода за пуповиной прошел лабораторные испытания и подтвердил, что он не содержит микробов .Тысячи людей использовали наш порошок для ухода за пуповиной, и они сообщают, что пуповина их ребенка имеет тенденцию отпадать через 2-5 дней.

Порошок для ухода за пуповиной работает так хорошо, что вы не используете весь порошок в этой бутылочке. Пуповина вашего ребенка отпадет до того, как вы закончите пить из бутылочки. Так что вы можете держать его в своей травяной аптечке. Это хорошо для порезов, царапин, ран и ожогов.

6 Процесс естественного исцеления

Частью естественного процесса заживления является то, что после отпадения пуповины она может немного кровоточить в течение нескольких дней, прежде чем полностью заживет.Просто продолжайте ухаживать за ним и наносите порошок для ухода за пуповиной.

Вам придется подождать, чтобы узнать, есть ли у вашего ребенка инни или аути. Вообще говоря, пуповина втягивается и становится более внутренней, когда ребенок развивается и укрепляет мышцы живота. Так что вам просто придется подождать и посмотреть.

7 Пожалуйста, не делайте этого:
  • Теперь мы знаем, что медицинский спирт слишком крепкий, и его не рекомендуется использовать для ухода за пуповиной младенцев.
  • В традиционных культурах считалось, что если надавить чем-то плоским на пупок, это будет инни, а не выход. Теперь мы знаем, что мы не знаем, что вызывает innie или outie. Однако мы знаем, что прижимать металл или монеты к пуповине негигиенично, и этого следует избегать.

8 Инфекция встречается редко

Инфекция пуповины встречается редко, но может произойти, поэтому, если вы заметили какой-либо из этих признаков, обратитесь к своему лечащему врачу:

  • Опухание или покраснение вокруг пуповины
  • Непрерывное кровотечение
  • Выделения с неприятным запахом, которые усиливаются
  • Боль в области
  • Комок, наполненный жидкостью
  • Лихорадка 100.4°F (38°C) или выше
  • Вялость, раздражительность и плохой аппетит


Вот это да, мама! Вы хорошая мама и умеете позаботиться о себе и своем ребенке! Я так горжусь тобой!

 

Я надеюсь, что это видео и пост помогли вам увидеть, насколько просто и легко ухаживать за пупком вашего новорожденного. Травы могут помочь этому пуповине быстрее отпасть и быстрее зажить. Они замечательные помощники, особенно для мам после родов и новорожденных.

 

Ознакомьтесь с другими нашими блогами о том, как использовать оставшуюся часть порошка для ухода за шнуром .  

 

 

 

Если вам интересно узнать больше о пуповине, посмотрите наше видео об отсроченном пережатии пуповины и узнайте, почему это так важно и должно быть частью вашего плана родов.

 

 

 

 

Грудное молоко для пуповины

В 2016 году Американская академия педиатрии (ААП) опубликовала рекомендации по уходу за пуповиной.Культя пуповины может сама инфицироваться (омфалит) или быть входными воротами для агрессивных болезнетворных бактерий. Факторы риска омфалита включают септические роды, стремительные домашние роды, низкий вес при рождении, длительный разрыв плодных оболочек, катетеризацию пуповины и хориоамнионит. Рекомендации по уходу за культей пуповины варьируются в зависимости от уровня ресурсов здравоохранения в стране. В Соединенных Штатах и ​​других странах с высоким уровнем ресурсов частота омфалита составляет 1 случай на 1000 младенцев, которым проводят «сухую пуповину», что означает, что на пуповину не наносятся антисептики.Использование хлоргексидина на пуповине, по-видимому, не дает преимуществ, учитывая низкий уровень инфицирования. Это может вызвать раздражение кожи и, возможно, выбрать более агрессивные бактериальные штаммы.

В странах с низким уровнем ресурсов риск омфалита составляет до 8% детей, рожденных в больницах, и до 22% детей, рожденных дома, поэтому Всемирная организация здравоохранения рекомендует ежедневно использовать антибактериальное средство, такое как хлоргексидин, для первые 7 дней к пуповине, чтобы предотвратить инфекцию.

Совместное проживание и контакт «кожа к коже» могут помочь снизить риск омфалита, поскольку они позволяют заселить ребенка здоровыми бактериями матери.

Так почему же мы говорим о грудном молоке на пуповине? Культя пуповины отпадает, потому что пуповина инвазирована иммунологическими клетками младенца и бактериями вокруг этой области. Использование антибактериального средства на пуповине может продлить время прикрепления пуповины и, следовательно, может увеличить риск инфекции с течением времени, поскольку пуповина остается прикрепленной после проведения антибактериальной обработки.Применение грудного молока к пуповине изучалось как стратегия предотвращения инфекции пуповины и ускорения времени отделения пуповины. В грудном молоке есть бактерии, а также биологически активные белки, которые помогают бороться с инфекцией, уменьшают воспаление и способствуют заживлению.

Авторы этого исследования провели систематический обзор 7 рандомизированных контролируемых испытаний, в которых оценивали нанесение грудного молока на культю пуповины. Обычно на пуповину каждые 8-24 часа наносили 4-6 капель свежесцеженного собственного грудного молока матери и давали высохнуть на воздухе.

Как вы думаете, насколько точны утверждения авторов этого систематического обзора относительно прикладывания грудного молока к культе пуповины? Выберите 1 или более:

  1. Среднее время отделения пуповины в большинстве исследований составляло 5–7 дней при лечении грудным молоком и 6–8 дней при лечении сухим уходом за пуповиной.
  2. Риск инфекции пуповины был выше при лечении грудным молоком, чем при лечении хлоргексидином.
  3. Риск инфицирования пуповины был примерно одинаковым при лечении грудным молоком по сравнению с сухим уходом за пуповиной.
  4. Молозиво более эффективно предотвращает инфекции пуповины, чем более зрелое грудное молоко.

РАНОЗОЛОЖИТЕЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУПОВОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ РАНЕ

Назад к тезисам 2019 года


РАНОЗОЛОЖИТЕЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУПОНОВОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ РАНЕ
Чжэ-А Юнг, доктор медицинских наук, Кьюнг-Чул Мун, доктор медицинских наук
Медицинский центр Корейского университета, Сеул, Южная Корея

В последнее время возрастает интерес к использованию клеточной терапии диабетических ран.Эти методы лечения предназначены для модуляции уровней биологических молекул, включая факторы роста и внеклеточные матрицы, которые могут способствовать заживлению ран. В продажу поступили различные типы заменителей кожи, состоящие из аллогенных или аутологических фибробластов и/или кератиноцитов. Хотя аллогенные клетки, полученные от здоровых доноров, уже доступны, они могут нести риск иммунологических реакций или перекрестных инфекций. Аутологичные клетки лишены этих недостатков. Однако они требуют длительного времени культивирования, а у пациентов с диабетом аутологичные клетки могут не обладать достаточной способностью стимулировать заживление ран.Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) могут быть хорошей альтернативой для лечения диабетических ран, поскольку они содержат как аллогенные, так и аутологичные клетки. МСК демонстрируют низкий уровень иммунного отторжения и могут делиться без апоптоза. Показано, что даже после 20-30 циклов удвоения клеток в культуре они сохраняют исходные свойства стволовых клеток. Соответственно, МСК вызывают большой интерес в области биоинженерии. Строма костного мозга (КМ) является одним из основных источников МСК.Предыдущие исследования, проведенные нашей группой, показали, что MSC, происходящие из костного мозга (BM-MSC), синтезируют большее количество коллагена, фактора роста фибробластов (FGF) и фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) in vitro по сравнению с дермальными фибробластами. Однако количество МСК в костном мозге уменьшается с возрастом, а приобретение является относительно инвазивным. Кроме того, из-за проблем, связанных с одобрением Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA), клиницистам в наши дни трудно использовать культивированные BM-MSC для заживления ран.Тем временем был разработан новый коммерческий препарат, в котором используются МСК, полученные из пуповинной крови человека (hUCB-MSC), и он получил признание корейского FDA за помощь в регенерации коленного хряща. Человеческие UCB-MSC могут быть получены в больших количествах без существенных этических проблем. Кроме того, стволовые клетки пуповинной крови более незрелые, чем взрослые МСК, и могут легко размножаться in vitro. Поскольку иммунная система новорожденных относительно незрелая, чем у взрослых, МСК, полученные из пуповинной крови, были успешно трансплантированы, не вызывая отторжения.Сегодня я покажу предыдущие исследования, проведенные нашей группой, продемонстрировавшие, что hUCB-MSC обладают превосходной активностью по заживлению ран по сравнению со здоровыми и диабетическими фибробластами не только в исследованиях in vitro, но и в исследованиях in vivo.


Назад к 2019 г. Тезисы

Криоконсервированная пуповина человека (TTAX01) для поздних стадий сложных незаживающих диабетических язв стопы (AMBULATE DFU) — полнотекстовый просмотр

BayArea Foot Care
Сан-Франциско, Калифорния, США, 94117
UCLA Olive View
Силмар, Калифорния, США, 91342
Университет Майами
Майами, Флорида, США, 33125
Институт ортопедии и позвоночника Палей
Уэст-Палм-Бич, Флорида, США, 33407
Университет Розалинды Франклин
Северный Чикаго, Иллинойс, США, 60064
Медицинский центр Окснера
Новый Орлеан, Луизиана, США, 70121
Синайская больница Балтимора
Балтимор, Мэриленд, США, 21215
Больничный центр Св. Луки-Рузвельта
Нью-Йорк, Нью-Йорк, США, 10025
Университет Северной Каролины
Чапел-Хилл, Северная Каролина, США, 27599
Контактное лицо: William Marston, MD         
Медицинский центр Novant Health Forsyth
Winston-Salem, North Carolina, United States, 27103
University Hospitals Richmond Medical Center
Ричмонд-Хайтс, Огайо, США, 44143
Орегонский университет здравоохранения и науки
Портленд, штат Орегон, США, 97239
Система здравоохранения Портленда, штат Вирджиния,
Портленд, штат Орегон, США, 97239
Медицинский центр Университета Вандербильта
Нэшвилл, Теннесси, США, 37212
JPS
Форт-Уэрт, Техас, США, 76104
Futuro Clinical Trials, LLC
Макаллен, Техас, США, 78501
Институт стопы и голеностопного сустава
Сент-Джордж, Юта, США, 84470
Научно-исследовательский институт Green Mountain
Ратленд, Вермонт, США, 05701
Клиника Carilion
Роанок, Вирджиния, США, 24013
.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *